使用Cygnus ELISA试剂盒该如何设置空白对照

空白对照的定义及其在ELISA测定中的应用

空白对照是指在实验设计中设置的一种阴性对照，旨在监测非特异性背景信号，并为基线吸光度值提供参考。在酶联免疫吸附测定（ELISA）中，通过引入空白对照，可以有效识别并扣除样品读数中的背景噪声，从而提高检测结果的准确性。然而，在多分析物ELISA测定中，由于其固有的高背景信号特性，这种标准化方法可能并不适用。本文将详细探讨为何在Cygnus的ELISA测定中通常不建议使用空白对照。

减去背景值对多分析物ELISA检测结果的影响

在多分析物ELISA测定中，如HCP ELISA，由于HCP抗体的复杂性，其背景信号通常较高。这使得此类检测的基线吸光度值（OD值）普遍高于简单的单分析物检测。从统计学角度来看，从样品读数中减去较高的基线OD值可能会增加数据的变异程度，从而影响结果的准确性和可靠性。

以下示例说明了背景值扣除对变异系数的影响。在表1中，标准A的平均OD值为0.100，标准B的平均OD值为0.150 。当通过原始读数减去空白对照的OD值来计算变异系数（CV）时，CV值显著上升，导致标准B的CV%从6.7%增加至20%。

 

检测背景值越高，对变异系数百分比的影响就越大。

 

表2展示了8种不同ELISA试剂盒在10组随机数据集中的平均变异系数（CV%）。基于原始OD值计算得出的CV%范围为10%至20%，而经过空白对照校正后的相同数据CV%则超过了20%。在所有情况下，经过空白对照校正后的CV%均高于未校正的数据。在实际应用中，分析数据放行的标准通常要求重复检测的CV%不超过20%，上述差异可能直接导致分析结果无法满足精密度要求，从长远来看，引入空白对照将直接导致测试结果无法符合放行要求。

 

从统计学角度来看，空白对照的OD值越高，出现此类问题的可能性就越大。

 

鉴于上述原因，Cygnus Technologies 致力于开发和提供无需背景校正的 ELISA 试剂盒。在我们已上市的 ELISA 试剂盒开发、分析及测试过程中，从未在批次放行的工作流程中引入空白对照校正步骤。相反，我们使用 0 ng/mL 标准品来设定 Y 轴截距并确定标准曲线的下限。因此，如果您在实验流程中加入了空白对照校正步骤，其获得的检测变异系数（CV）百分比很可能会高于 Cygnus 质控团队所记录的结果。Cygnus针对每一种检测试剂盒均提供相应的QS（Qualification Summary）文件，如有需求欢迎点击这里填写信息索取，或直接联系Cygnus中国总代理西美杰。如您在使用Cygnus HCP ELISA试剂盒的过程中遇到任何问题，我们的技术支持团队将竭诚为您提供解决方案和建议。

 

Cygnus Technologies专注为生物技术和生物制药行业提供产品和分析方法超过25年，旨在加速研发阶段和提高产品质量。Cygnus开发和生产的生物工艺残留试剂盒，用于检测超过50种不同表达系统的特异性杂质。Cygnus作为专注于生物技术应用免疫检测的高灵敏度分析技术的专家，其产品和服务已经被全球超过95%以上生物制药公司使用，并获得FDA、NMPA、EMA等监管机构的广泛认可。

北京西美杰科技有限公司作为Cygnus在中国总代理，与国内众多知名药企，CRO/CMO企业建立了长久稳定的合作关系。多年来西美杰的产品及服务帮助许多企业加速R&D阶段，提高药物质量、纯度和安全，加速优化研发工艺，减少产品上市时间，降低QC成本。如您对上述产品感兴趣，欢迎致电西美杰客服热线400-050-4006或者登陆网站www.xmjsci.com了解更多信息。