ELISA方法的基本类型、用途及操作程序

ELISA方法的基本类型、用途及操作程序

1、直接ELISA试剂盒

    本法首要用于检测抗体。以鸭病毒性肝炎（DVH）抗体的ELISA为例，直接ELISA的操作程序如下：

(1) 资料

① 包被液、洗刷液、保温液、底物液、停止液；

② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参阅血清；待检鸭血清；

③ ELISA检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。

(2) 方法过程

① 加抗原包被 → 4℃过夜，洗刷三次、抛干

② 加待检血清 → 37℃ 2小时，洗刷三次、抛干

③ 加酶标抗体 → 37℃ 2小时，洗刷三次、抛干

④ 加底物液 → 37℃ 30分钟，加停止液

⑤ 用ELISA检测仪测定OD值，并计算出P/N比值。

(3) 成果判定 已知阳性血清与已知阴性血清的比值（P/N）≥2.1，并且已知阳性血清的OD值≥0.4；在上述条件建立的情况下，如果待检血清与已知阴性血清的比值（P/N）≥2.1，并且待检血清的OD值≥0.4，则判为阳性，不然判为阴性。

2、双抗体夹心ELISA试剂盒

    本法首要用于检测大分子抗原。现以检测鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）的双夹心抗体ELISA为例介绍本法的操作程序。

① 加抗体包被 → 4℃过夜，洗刷三次、抛干

② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟，洗刷三次、抛干

③ 加酶标抗体 → 37℃ 30分钟，洗刷三次、抛干

④ 加底物液 → 37℃ 15分钟，加停止液

⑤ 用ELISA检测仪测定OD值。

3、双夹心ELISA试剂盒

    此法与双抗体夹心ELISA的首要差异在于：它是采用酶标抗抗体查看多种大分子抗原，它不只不用符号每一种抗体，还可进步试验的敏感性。

此法的根本程序为：

① 加抗体（Ab-1）包被 → 4℃过夜，洗刷三次、抛干

② 加待检抗原（Ag） → 37℃ 60分钟，洗刷三次、抛干

③ 加用非同种动物出产的特异性抗体（Ab-2）→ 37℃ 60分钟，洗刷三次、抛干

④ 加入酶标抗Ab-2抗体（AB-3）→ 37℃ 60分钟，洗刷三次、抛干

⑤ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加停止液

⑥ 用ELISA检测仪测定OD值。