细胞复苏注意事项

细胞复苏注意事项：

1、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例，配置相应的完全培养基，确保细胞培养条件与说明书一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。每株细胞2支冻存管复苏时建议先只复苏一支，若首次复苏出现问题请及时与我们取得联系。

2、取出冻存管，浸入37℃温水浴中，并不时摇动令其尽快融化，注意管口不要没入水面以下，以免造成污染。

3、从37℃水浴中取出冻存管，用75%酒精擦拭冻存管表面，放入超净台内。吸出细胞悬液，转移至培养瓶内，补加6~8mL培养液，37℃温箱静置培养，隔天换新鲜培养液，以去除DMSO，或者复苏当时离心去除DMSO，并在显微镜下观察细胞状态和密度；对于贴壁展开较慢的细胞，建议复苏当时去除DMSO，待细胞贴壁展开后再换液。（原代细胞：细胞悬液离心后观察管底沉淀初步判断细胞量，后行台盼蓝染色以确定细胞存活率；接种后隔天观察细胞贴壁量，以判定细胞贴壁率）

4、贴壁细胞：过夜培养后多数细胞会重新贴壁，待汇合度80% 左右时正常传代。若细胞仍不能贴壁，请用台盼蓝染色法鉴定细胞活力。如台盼蓝染色证实细胞活力正常则1000rpm离心3~5min收集细胞，用新鲜培养基重悬后移回培养瓶内重新贴壁培养；如台盼蓝染色证实细胞无活力，请在收到细胞24小时内联系我们，并反馈真实的细胞状态照片和台盼蓝染色照片，我们将尽快帮您解决。

5、悬浮细胞：过夜培养后多数细胞会逐渐恢复活力，有光泽、饱满。若细胞光泽暗淡，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，如台盼蓝染色证实细胞无活力，请在收到细胞24小时内联系我们，并反馈真实的细胞状态照片和台盼蓝染色照片，我们将尽快帮您解决。

6、建议客户在收到细胞后每天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和中国微生物菌种查询网技术部沟通交流。