蓝色荧光细胞核染色分析试剂盒产品说明书

YIJI蓝色荧光细胞核染色分析试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

YIJI蓝色荧光细胞核染色分析试剂是一种旨在通过使用荧光染料DAPI与细胞核DNA特异性结合，并发出荧光检测信号，用于分析和观察细胞核形态或DNA含量以及双重染色或重叠染色定位的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞核（动物、人体、植物、昆虫等）的观察。产品即到即用，性能稳定，荧光清晰。

技术背景

作为细胞DNA染色剂之一的4,6-二咪基－4-联苯基吲哚（4,6-diamidino-2-phenylindole；DAPI）特异性地与DNA双螺旋的凹槽部分发生相互作用，从而与DNA的双链紧密结合。结合后产生的荧光基团的吸收峰是358nm而散射峰是461nm，正好是UV（紫外光）的激发波长356nm，使得DAPI成为一种常用的荧光检测信号，并作为双重染色或重叠染色的主要染色剂之一。

产品内容

YIJI清理液（Reagent A）     200毫升

YIJI固定液（Reagent B） 50毫升

YIJI扩张液（Reagent C） 50毫升

YIJI染色液（Reagent D） 20毫升

YIJI抗淬灭剂（Reagent E）  5毫升

产品说明书            1份

保存方式

保存YIJI固定液（Reagent B）、YIJI染色液（Reagent D）和YIJI抗淬灭剂（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；YIJI染色液（Reagent D）和YIJI抗淬灭剂（Reagent E）避免光照；有效保证6月

用户自备

微型台式离心机：用于悬浮细胞的操作

盖玻片：用于染色后封片

荧光显微镜：用于观察细胞核DNA染色

实验步骤

• 贴壁细胞染色
• 准备1个细胞培养24孔板的待测细胞，每孔铺满率达70％

（注意：可以使用载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和其它培养孔板，见注意事项6）

• 小心抽掉细胞培养液
• 小心加入500微升YIJI清理液（Reagent A）
• 小心抽掉YIJI清理液（Reagent A） 
• 小心沿着孔壁加入500微升－20℃预冷的YIJI固定液（Reagent B）， 覆盖培养孔表面
• 在4℃冰箱里孵育6分钟
• 小心抽掉YIJI固定液（Reagent B）
• 小心沿着孔壁加入500微升YIJI清理液（Reagent A），覆盖培养孔表面
• 在室温下孵育5分钟
• 小心抽掉500微升YIJI清理液（Reagent A）
• 小心加入500微升YIJI通透液（Reagent C），覆盖培养孔表面
• 在室温下孵育5分钟
• 小心抽掉500微升YIJI通透液（Reagent C）
• 小心加入500微升 YIJI清理液（Reagent A），覆盖培养孔表面
• 小心抽掉500微升YIJI清理液（Reagent A），空气中晾干

（注意：由此步骤开始，用户可以进行抗体荧光染色或其它荧光染色）

• 小心加入200微升YIJI染色液（Reagent D），覆盖培养孔表面
• 室温下孵育10分钟，避免光照
• 小心抽掉200微升YIJI染色液（Reagent D）
• 小心加入500微升 YIJI清理液（Reagent A），覆盖培养孔表面
• 即刻在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长350nm，散发波长460nm（细胞核呈现蓝色）

悬浮细胞染色

• 将悬浮细胞（1 X 10⁶细胞）移入到1.5毫升离心管
• 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉上清液
• 小心加入500微升YIJI清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
• 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉YIJI清理液（Reagent A） 
• 轻轻指弹，松动细胞颗粒群
• 一滴一滴加入500微升－20℃预冷的YIJI固定液（Reagent B），混匀细胞颗粒群
• 在4℃冰箱里孵育6分钟
• 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉YIJI固定液（Reagent B）
• 小心加入500微升YIJI清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
• 在室温下孵育5分钟
• 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉500微升YIJI清理液（Reagent A）
• 小心加入500微升YIJI通透液（Reagent C），混匀细胞颗粒群
• 在室温下孵育5分钟
• 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉500微升YIJI通透液（Reagent C）
• 小心加入500微升 YIJI清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
• 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉500微升YIJI清理液（Reagent A）

（注意：由此步骤开始，用户可以进行抗体荧光染色或其它荧光染色）

• 小心加入200微升YIJI染色液（Reagent D），混匀细胞颗粒群
• 室温下孵育10分钟，避免光照
• 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉200微升YIJI染色液（Reagent D）
• 小心加入400微升 YIJI清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
• 放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心抽掉400微升YIJI清理液（Reagent A）
• 小心抽掉100微升YIJI清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
• 移出5微升到载玻片上，放上盖玻片
• 即刻在荧光显微镜下进行观察：激发波长350nm，散发波长460nm（细胞核呈现蓝色）

载玻片染色

• 准备1个细胞载玻片
• 小心加上100微升YIJI清理液（Reagent A）
• 小心抽掉YIJI清理液（Reagent A） 
• 小心加上100微升－20℃预冷的YIJI固定液（Reagent B）， 覆盖载玻片表面
• 在4℃冰箱里孵育6分钟
• 小心抽掉YIJI固定液（Reagent B）
• 小心加上100微升YIJI清理液（Reagent A），覆盖载玻片表面
• 在室温下孵育5分钟
• 小心抽掉100微升YIJI清理液（Reagent A）
• 小心加上100微升YIJI通透液（Reagent C），覆盖载玻片表面
• 在室温下孵育5分钟
• 小心抽掉100微升YIJI通透液（Reagent C）
• 小心加上100微升 YIJI清理液（Reagent A），覆盖载玻片表面
• 小心抽掉100微升YIJI清理液（Reagent A），空气中晾干
• 重复实验步骤13至14一次

（注意：由此步骤开始，用户可以进行抗体荧光染色或其它荧光染色）

• 小心加上100微升YIJI染色液（Reagent D），覆盖载玻片表面
• 室温下孵育10分钟，避免光照
• 小心抽掉100微升YIJI染色液（Reagent D）
• 小心加上100微升 YIJI清理液（Reagent A），覆盖载玻片表面
• 小心抽掉100微升YIJI清理液（Reagent A）
• 小心加上50微升 YIJI抗淬灭液（Reagent E）
• 盖上盖玻片
• 即刻在荧光显微镜下进行观察：激发波长350nm，散发波长460nm（细胞核呈现蓝色）

注意事项

• 本产品为100次（4个24孔培养板）和200次（载玻片）操作规格
• 本产品友好使用于双重染色或重叠染色
• YIJI染色液（Reagent D）为半通透性染料
• 操作时须戴手套
• 操作时，避免污染母液
• 本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和各种培养孔板，须相应调整试剂溶液：

• 本产品可用于悬浮细胞或细胞脱离处理后染色
• 本公司提供系列细胞核染色分析试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定荧光清晰