总GLP-1酶免试剂盒使用说明书

【预期用途】

该高灵敏度ELISA（酶联免疫吸附测定）试剂盒是专门用来定量检测血浆样本中的胰高血糖素样肽-1（7-36）[GLP-1（1-36）]和（9-36）[GLP-1(9-36)]的总浓度。哺乳动物的GLP-1肽链的基本氨基酸序列完全相同，如：小鼠、大鼠、猪、狗、猴、人等。该试剂盒仅适用于科学研究。

【实验原理】

该ELISA的设计，研发和生产的目的是对血清样品中的活性GLP-1（7-36）和GLP-1(9-36)进行定量检测。它是基于运用两个GLP-1特异性抗体与两个位点结合的“双位点夹心”技术。

将标准品、质控品、和待测样品加入链霉亲和素包被的微孔板中。随后，将生物素偶联的GLP-1特异抗体和HRP标记的GLP-1特异抗体混合物添加到各个孔中。经过第一个保温孵育期，形成了“链霉亲和素-生物素抗体- GLP-1（7-36）/(9-36)-HRP标记抗体”的“双位点夹心”结构，该复合体被微孔板的内壁吸附住。游离的HRP标记抗体和缓冲基质则在洗涤过程中被冲走。微孔板加入过氧化物酶基质（3,3',5,5'-四甲基联苯胺，TMB）并经过一段时间的反应后，然后用酶标仪测量吸光度。微孔板内壁的免疫复合体与GLP-1（7-36）/(9-36)的连接酶活性与样本中的总GLP-1数量成正比。

简要实验步骤

• 在各指定孔中分别添加100µL标准品、质控品和病人样本；
• 在各孔中添加100µL抗体混合物；
• 2-8℃静置培养20-24小时；
• 用洗涤缓冲液稀释液洗净条带；
• 在各孔中添加200 µL的TMB基质；
• 室温下静置20分钟；
• 添加50 µL终止液；
• 读取450nm/620nm和450nm/650nm下的吸光度。