原代细胞甲基绿-哌咯宁法显示DNA和RNA

 

基本原理：

甲基绿（methyl green）和哌咯宁（pyronin）均为碱性染料，因此可与带负电荷的磷酸根形成盐。甲基绿分子有2个正电荷，易与双链DNA分子结合使原代细胞核内的DNA呈蓝绿色。哌咯宁分子有一个正电荷，易与单链RNA分子结合使原代细胞质和核仁内的RNA显示红色。也有人认为染色原理与核酸分子的空间构型有关。

 

配制试剂：

1.       0.2mol/L pH4.8的乙酸缓冲液的配制

将1.2ml冰乙酸加蒸馏水定容至100ml，在使用时再加2.72g乙酸钠（NaAc·3H2O），待完全溶解后，即可使用；

2.       甲基绿-哌咯宁染色液配制

A液：取2g甲基绿加入100ml pH4.8的0.2mol/L的乙酸缓冲液中即可；

B液：取1g哌咯宁加入100ml pH4.8的0.2mol/L的乙酸缓冲液中即可；

用时将A、B液按5：2混合即可；

 

染色步骤：

1.       取培养于盖玻片上的贴壁原代细胞，用Hanks液漂洗三次；

2.       70%乙醇溶液固定10min，取出后晾干；

3.       滴加甲基绿-哌咯宁染色液覆盖盖片样品，染色15min；

4.       蒸馏水冲洗3次；

5.       95%乙醇分色，晾干；

6.       用二甲苯透明，用光学树胶封片后观察；

 

结果：

原代细胞核因含DNA呈绿色，细胞质及核仁因含RNA呈红色；