原代贴壁细胞吉姆萨染色法

原代贴壁细胞吉姆萨染色法

染液制备：

1. 称取0.5g吉姆萨粉和22ml甘油；

2. 取少量甘油与吉姆萨粉在研钵内充分混合，研磨至无颗粒；

3. 将剩余的甘油倒入研钵，于56℃保温2h；

4. 加入33ml纯甲醇混匀，即为吉姆萨母液，将其保存于棕色试剂瓶内；

5. 取9份pH6.80—7.38的Sorensen缓冲液和1份吉姆萨母液混合即得染色液；

贴壁细胞染色步骤：

1. 去除培养器皿内的培养液，用平衡盐溶液反复漂洗单层培养物2次；

2. 加入平衡盐溶液，再逐滴加入等体积甲醇，边加边混合，静置10min；

3. 将50%甲醇-BSS混合液丢弃，加入新鲜的甲醇液浸泡固定细胞10min，然后用甲醇漂洗细胞1次；

4. 将瓶内细胞干燥后储存或直接染色；

5. 按2ml/cm2的比例滴加吉姆萨染液，覆盖细胞层，染色2min；

6. 移除染液，用自来水冲洗掉粉红色背景后，再用去离子水冲洗细胞；

7. 用显微镜观察单层潮湿细胞。若细胞已干，可重新使细胞潮湿后再观察；

结果：

细胞核被染成紫红色或紫蓝色，而细胞质则被染成浅红色；

吉姆萨染色法注意事项：

1. 染液宜现用现配，旧染液染色效果不佳。染液保存时间不宜超过48h；

2. 吉姆萨对pH极敏感，因此，缓冲液pH要准确，否则染色效果不佳。如用染色缸染色时，随染色时间的延长，在染液表面常形成一层氧化膜（发亮）易附着在玻片上形成污秽，且不易除掉。因此在用染色缸染色，尤其用的不是现配者时，染色前应先用小片滤纸刮除液面的氧化层再进行染色。染色完毕，应把标本浸入水中漂洗染液；