正常滑膜细胞原代培养

正常滑膜细胞原代培养

实验材料：

1. 实验动物：大鼠、兔，人手术切除的关节等；

2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2；

3. 培养液：RPMI1640培养基，补加15%小牛血清；

实验方法：

1. 将大鼠处死后，用75%酒精消毒；

2. 用手术剪剖开其四肢皮肤与肌肉，暴露长骨两端的关节，取出关节面滑膜组织置于盛有缓冲液的培养皿中；

3. 剔除滑膜组织外层结构及周边软骨组织，用缓冲液洗2—3次；

4. 将滑膜组织置于盛有少量小牛血清的培养皿中，剪碎成1mm×1mm×1mm大小的植块；

5. 将制备的植块接种到螺旋口培养瓶中。反转培养瓶，使植有组织块的一面朝上，加入培养液，盖好瓶盖。将培养瓶放入含5%CO2的培养箱中，在37℃条件下进行培养；

6. 培养4h后，组织块较牢黏附于瓶底时，再轻轻反转培养瓶，继续培养；

7. 培养3d后换培养液；