血清在细胞培养中的作用及筛选方法步骤详解

血清，指血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白原及某些凝血因子后分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆。
 

血清在细胞培养中的作用主要有以下几点：

1. 提供对维持细胞指数生长的激素，特别是基础培养基中没有或量很少的营养物，还包括一些主要的低分子营养物；

2. 提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力；

3. 血清中含有一些微量元素，有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用；

4. 细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源；

5. 血清蛋白形成了血清的粘度，可以保护细胞免受机械损伤，特别是在悬浮培养搅拌时，粘度起到重要作用；

6. 抑制蛋白酶的作用，在贴壁细胞传代时可将剩余胰蛋白酶失活，从而保护细胞。

虽然我们对血清的功能清楚，但血清的成份非常复杂，时至今日对其准确的成份、含量及其作用机制仍不清楚，尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂类等尚未充分认识；其次血清都是批量生产,各批量之间差异很大，而且血清保存期至多一年，因此，要保证每批血清的相似性极为困难，在细胞培养中避免不了要做血清筛选，那如何筛选血清呢？

先来了解一下我们常用的血清。

目前Hyclone 、Gibico、Biowest、Life-iLab、Gemini等品牌血源用户相对较多，可信度较高。但由于血清产品的特殊性，同一品牌的血清不同批次的血清也会有很大差异。

血清的种类：现常用血清主要是牛血清、人血清、马血清等。其中牛血清来源充足、制备技术成熟、经过长时间的应用考验人们对其有比较深入的理解，故而是常用的血清。牛血清有小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清是品质高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。

血清的质量标准：

1. 内毒素标准为不高于5EU/ml

2. 总蛋白含量胎牛血清一般范围是30-40mg/ml，数值偏高偏低都会影响实验的正常进行

3. 血红蛋白标准为不高于20mg/dl

4. pH。国产血清、大多高于7.5，进口胎牛血清，大多低于7.5，根据PH的高低可用来初步鉴别血清的来源

5. 微生物。包括细菌、霉菌、支原体、噬菌体、各类病原性病毒等，大多都能清除。大肠杆菌噬菌体无法过滤，很难清除，但对血清质量影响不大。病原性病毒，在国产血清中几乎90%以上都存在，是影响国产血清质量的重要原因之一

在实际筛选时，主要从血清外观和实验操作时细胞的生长状态进行。

从外观上：

1. 颜色：根据血红蛋白含量的不同，胎牛血清可表现出黄色或红色，这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度。胎牛血清或多或少总有点溶血，因为胎牛血清凝血功能差，红细胞容易破裂；

2. 澄清度：高质量的胎牛血清由于蛋白和脂类等物质含量低，表现为稀薄、清淡；

3. 血清沉淀：血清中的沉淀是由纤维蛋白的凝聚产生，对血清质量没有影响，沉淀的产生原因跟加工生产方式、是否反复冻融密切相关，在实验操作中可能会对细胞观察产生影响。

从性能上：

1. 细胞形态，在进行血清筛选时首先观察细胞的生长形态是否产生明显变化，以及观察贴壁细胞的贴壁情况，细胞在不同血清培养中可能会出现形态上的差异；

2. 倍增时间，一般情况下会选择倍增时间短的血清，值得注意的是血清的影响会传至5代，在进行测试时，最好培养五代后进行计倍增时间的计算；

3. 克隆形成率，测试时一般选50、100、200个细胞进行平板克隆测试，平均5d左右换一次液，两周后染色计数，对比克隆形成情况。