HEK293培养基适合于不同亚型HEK293细胞的高密度悬浮培养
上海惠诚生物提供的HEK293 瞬转表达基础培养基（Basal Medium）与补料培养基（Feed Medium）是完全化学成分限定（Chemically Defined），均不含血清、水解物及任何动物来源的成分，适合于不同亚型 HEK293 细胞的高密度悬浮培养，可实现重组蛋白和抗体的高水平表达：培养 5 天表达量在200mg/L 左右，7 天表达量 500mg/L 左右，部分可达 1g/L 以上。
上海惠诚生物提供的HEK293 瞬转表达培养基已完成美国 DMF 登记（DMF039790），更有力的支持客户需求。
HEK293 细胞培养基产品描述
| 名称 | 备注 | 谷氨酰胺 | 葡萄糖 | 生长因子 | 适用细胞 |
| HEK293 CD05 | 初始培养基 | 含 | 6 g/L | 不含 | Expi293F 等 |
| HEK293 FM01AB | 补料培养基 | 不含 | 60g/L | 不含 | |
| HEK293 enhancer | 分泌性蛋白表达增强剂 | 不含 | |||
| PEI | 转染试剂 | 0.5mg/mL | |||
推荐使用说明
| 步骤 | 使用方法 |
| 关键参数汇总 | 转染时细胞密度：3~5e6 cells/mL, DNA: 1.3mg/L, PEI:4mg/L |
| 细胞传代 |
0.3 e6 cells/mL 接种，3 天传代一次，当细胞倍增时间不低于对照培养基时认为细胞完全适应新培养基，进入下一步骤 |
| 转染前一天 | 细胞密度调整到~2 e6 cells/mL 左右 |
| 质粒与 PEI 预处理 |
以 20mL 培养体积为例（其他培养体积，相关试剂需要按体积折算） 1： 取 160uL Trans PEI (母液是 0.5mg/mL),加入 1mL HEK293 CD05 培养基混合均匀； 2：像 1）中混合液体中加入 26ug 的质粒（即质粒用量 1.3mg/L)，混合均匀； 3: 静止 15~20min |
| 转染 |
1：用新鲜培养基调整细胞密度至 3~5 e6cells/mL (很重要）； 2：缓慢滴加上述 PEI 与 DNA 的混合物，并摇动摇瓶使混合物均匀分散； 3：转染当日记为 Day0，放入 37℃摇床中，完成转染； |
| 补料培养 |
1：转染后~24h 内补加 0.5%的 HEK293 enhancer （ 仅此一次，且只分泌性蛋白或抗体需要添加 ，膜蛋白无需加 HEK293 enhancer）和 7%的 HEK293 FM01AB； 2：Day4 再补加一次 7%的 HEK293 FM01AB 和 3g/L 的葡萄糖 （如培养时间≤5 天，此步忽略）； 3：活力≤70%即可培养结束或其他指定培养基时间 |
| 温度及其他参数 |
1：温度 37℃，不降温 2：摇床转速 120rpm, 50mm 振幅，5-8% CO2； |
产品运输及存储
运输：常温或冷链运输；
存储：2~8℃，干燥、避光保存；
有效期：基础培养基干粉：2 年；
基础培养基液体：1 年；
补料培养基干粉：2 年；
补料培养基液体：1 年（开封后建议在 3 个月内使用完）。
应用范围
上海惠诚生物生物提供的培养基可用于 HEK293 细胞冻存、复苏、传代、高密度强化工艺培养及灌流培养，可
实现细胞快速生长，维持细胞高活率及蛋白该表达。
使用指南
细胞冻存
1．准备处于对数生长期状态较好的细胞，且细胞活率在 90%以上；
2．检测活细胞密度，计算所需的冻存培养基体积，计算最终细胞密度 1~1.5×10 7 cells/mL；
3．准备好所需的冻存培养基：90%基础培养基+10% DMSO，2~8℃冷藏保存；
4．设置离心力 200×g，离心 5 min，用冻存培养基重新悬浮细胞至冻存体积；
5．将悬浮细胞等分保存至适宜规格的细胞冻存管中；
6．将细胞冻存管置于程序降温盒中，按照降温标准进行降温；
7．将细胞转移到液氮罐中保存。
细胞复苏
1．提前打开水浴锅，并设置温度至 36.5℃~37.0℃；
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上海惠诚生物科技有限公司自2010年成立以来，一直致力于为客户提供试剂，仪器设备和耗材一站式服务。目前在苏州和南通的研发生产基地，专注于体外诊断蛋白，靶标蛋白，工业用酶和细胞因子的生产和定制，按照GMP标准，为工业客户提供大包装蛋白原料。
