猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒使用说明书

【产品名称】
通用名：猪瘟病毒阻断ELISA 抗体检测试剂盒
英文名：Blocking ELISA Kit For Detection of Antibodies to Classical Swine Fever Virus

【包装规格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

【预期用途】 猪瘟是由猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus，CSFV）引起的猪的一种高度接触性、出血性和致死性传染病，其特征为高热稽留和微血管壁变性而引起的广泛出血、坏死、梗塞等，慢性以纤维素坏死性肠炎为特征。
本试剂用于检测猪血清中猪瘟病毒抗体，可用于猪瘟病毒疫苗免疫效果评价。

【试剂盒组成】

序号	名称	规格/96T×1	规格/96T×2	规格/96T×5
1	酶标记物	11ml×1(红盖)	11ml×2(红盖)	26ml×2(红盖)
2	样品稀释液	25ml×1(黄盖)	50ml×1(黄盖)	125ml×1(透明)
3	20X浓缩洗涤液	40ml×1(白盖)	40ml×1(白盖)	200ml×1(透明)
4	底物显色液	10ml×1(黑盖)	10ml×2(棕盖)	25ml×2(黑盖)
5	终止液	5ml×1(黄盖)	10ml×1(黄盖)	25ml×1(黄盖)
6	阳性对照	1.0 ml×1(红盖)	1.5 ml×1(红盖)	2.0 ml×1(红盖)
7	阴性对照	1.0 ml×1(绿盖)	1.5 ml×1(绿盖)	2.0 ml×1(绿盖)
8	酶标板	96T×1	96T×2	96T×5
9	盖板膜	1	2	5
10	自封袋	1	1	2
11	说明书	1	1	1
12	稀释板	1	2	5

 
【储存及有效期】 2～8℃保存，有效期12个月。
    包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。

【适用仪器】 含630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。

【样品准备】
1.取动物全血，待血液凝固后，以4000r/min 离心10分钟，收集血清；或待血液凝固后自然析出血清，再收集血清。血清应清亮，无溶血。
2.用样品稀释液将待检血清按1:1稀释（如100μl血清加入100μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。
3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)，如果发现有结晶加热使其溶解后再使用。
温馨提示：先使用血清稀释板稀释完所有的待检血清、再将稀释好的血清转移到抗原包被板上，使反应时间一致。

【检验方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条，设阴性、阳性对照各2孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存，每孔加入工作洗涤液 300μl，无需静置，甩掉板孔中的洗涤液，重复洗涤2次，最后一次拍干。
3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。
4.混匀，盖好盖板膜，置37℃（推荐水浴）避光反应2小时。
5.甩去孔内液体，每孔加300μl工作洗涤液，无需静置，甩掉板孔中的洗涤液，重复洗涤5次，最后一次拍干。
6.每孔加酶标记物100μl，盖好盖板膜，置37℃避光反应30分钟。
7.洗涤，同步骤5。
8.每孔加入底物显色液100μl，置室温( 20～25℃)避光反应10分钟。
9.每孔加入终止液50μl，混匀，10分钟内于630nm测定各孔吸光值。 

【参考值】 实验正常的情况下，阴性对照的平均OD值即ODNC应≥0.6，阳性对照的平均OD值即ODPC应≤0.5。

【检验结果的判定】
1.PI（阻断率）=（1- 阴性对照平均A值(样本A值)）×100%。
2.PI≥40%为阳性；PI<40%为阴性。
3.本实验结果为阴性时表明猪只抗体水平不足，建议补打相应疫苗。

【试验方法的局限性】
该试验仅作为定性检测猪血清、血浆中猪瘟病毒抗体，根据PI值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。

【注意事项】
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.若试剂盒阴阳性对照、酶标记物出现少量悬浮物，属于正常现象。
4.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。
5.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。
6.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。
7.用于检测的样品应保持新鲜。
8.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
9.不同批号试剂组分不得混用。