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胎牛血清( FBS)存放与解冻方法分析

浏览次数:1043 发布日期:2024-10-17  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负
胎牛血清(Fetal Bovine Serum, FBS)是一种广泛应用于细胞培养领域的生物制品,具有丰富的营养成分和生物活性物质,能够支持细胞生长、分化和维持正常生理功能。胎牛血清是通过对未出生胎牛穿刺采血,经过自然层析、离心、微滤等处理得到的上清液。主要成分包括蛋白、因子、激素等,具有提供营养、促进生长、保护细胞等功能。使用时需正确储存、解冻和配制,避免反复冻融和静置过久。

胎牛血清的主要成分:

①各种蛋白:白蛋白、球蛋白、纤连蛋白、转铁蛋白等;
②因子:各种生长因子等;
③各种激素:胰岛素、促生长激素、氢化可的松等;
④其他微量元素、维生素、离子等;
⑤不明确的成分:由于胎牛血清是天然生物制品,FBS中还存在部分不明确的生物成分。

胎牛血清的主要功能:

①提供营养:胎牛血清中的各种蛋白可提供细胞分裂所需的营养物质
②促进生长:胎牛血清中的各种生长因子和激素可促进细胞生长
③保护细胞:胎牛血清带有一定粘稠度,且有酸碱缓冲液的作用,可保护细胞
④提供蛋白酶抑制剂:提供蛋白酶抑制剂,中和剩余的胰蛋白酶的消化,保护细胞
⑤提供贴壁因子:胎牛血清提供贴壁因子,是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子的来源。

胎牛血清的正确存放与解冻是各位实验家尤为关注的一个问题,经过专业人员从其成分中分析,在保证质量的前提下,胎牛血清的正确存放与解冻的方法,总结如下:

 
1、保存血清最好的方法?

我们建议血清应保存在-5℃至-20℃。然而,若存放于4℃时,请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶,建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。

2、如何解冻血清才不会使产品质量受损?

我们建议您将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。

3、血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,该如何处理?

血清中沉淀物的出现有许多种原因,但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成,而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后,也会存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但少量这些絮状沉淀物,并不影响血清本身的质量。

若您欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g 稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞您的过滤膜。

4、为什么要热灭活血清?

加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养ES 细胞,昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。

5、有必要做热灭活吗?

实验显示,经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。因此我们建议您,若非必须,您可以不需要做热处理这一步。如此一来,不但节省您宝贵的时间,更确保血清的质量! 

6、为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现少量沉淀?


胎牛血清没有预老化,储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的质量。推荐在-20℃储存胎牛血清,避免反复冻融。

7、如何避免沉淀物的产生?

我们建议您在使用血清的时候,注意下列的操作:

解冻血清时请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),实验显示非常容易产生沉淀物。解冻血清时请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。
来源:抚州翊立飒生物科技开发有限公司
联系电话:18322999038
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