豆芽中4种植物生长素的UPLC/MS/MS测定（QuEChERS）
豆芽中4种植物生长素的UPLC/MS/MS测定（QuEChERS）
《BJS 201703 豆芽中植物生长激素的测定》
一、样品提取
准确称取 10.0 g 经粉碎的豆芽置于50 mL离心管中，加入20 mL 含 1% 甲酸乙腈溶液，2500 rpm 涡旋混匀 5 min；然后加入 QuEChERS 萃取盐包(货号：Q050025 )，立即手动振摇 30s，涡旋 2min；再以 5000r/min 离心5min，使乙腈和水分层，上层乙腈层待净化。
二、样品净化
精密量取上层乙腈层5 mL置于 QuEChERS净化管(货号：Q015014 )15 mL净化管中，2500 rpm 涡旋混匀 2min，以 5000 r/min 离心5 min，移取上层清液4 mL于另一 15 mL 离心管中，45℃水浴氮吹至干，用甲醇定容至 1mL，过 0.22 µm 尼龙滤膜供上机测试。
三、标曲配制
称取空白豆芽样品 10.0 g 按照上述一、二步骤操作，作为空白基质提取液；分别精密量取一定量的混合标准液加入到空白基质提取液中，用甲醇定容至 1 mL，配制成适当浓度的基质混合标准工作溶液。
四、仪器条件
色谱条件
仪器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TQS Endura）
色谱柱：OSD色谱柱 (2.1 mm×50 mm, 1.8 µm)
流动相：A：5 mmol/L 乙酸铵
B：甲醇（0.1% 甲酸）
洗脱方式：梯度洗脱，见表 1
表 1 梯度洗脱程序
流速：0.3 mL/min 柱温：35℃ 进样量：5 µL
质谱条件
离子源：HESI 电喷雾电压：3500 V
鞘气压力：35 arb 辅气压力：3 arb
离子传输管：380℃ 辅气温度：420℃
表 2 组分名称、保留时间及特征离子一览表（* 为定量离子）
五、实验结果
表 3 豆芽中 4 种植物生长激素加标回收结果（25.0 µg/kg）
豆芽中植物生长激素检测色谱图如下：
从上至下出峰顺序依次为：4- 氯苯氧乙酸、2,4- 二氯苯氧乙酸、6- 苄基腺嘌呤、赤霉素。注意事项：
1. 该实验采用 UPLC/MS/MS 检测，对部分目标物有基质抑制效应，如 6- 苄基腺嘌呤，建议配制基质混合标准工作液进行定量，校正回收率。
2. 在标准《BJS 201703》中，只取 4 mL 提取液进行净化，离心后取全部净化液氮吹复溶，但在实际操作中，离心后实际氮吹复溶的净化液体积不到 4 mL，会造成检测结果偏低，建议取 5 mL 提取液净化，再精密量取 4 mL 净化液氮吹复溶
订购信息
《BJS 201703 豆芽中植物生长激素的测定》
一、样品提取
准确称取 10.0 g 经粉碎的豆芽置于50 mL离心管中，加入20 mL 含 1% 甲酸乙腈溶液，2500 rpm 涡旋混匀 5 min；然后加入 QuEChERS 萃取盐包(货号：Q050025 )，立即手动振摇 30s，涡旋 2min；再以 5000r/min 离心5min，使乙腈和水分层，上层乙腈层待净化。
二、样品净化
精密量取上层乙腈层5 mL置于 QuEChERS净化管(货号：Q015014 )15 mL净化管中，2500 rpm 涡旋混匀 2min，以 5000 r/min 离心5 min，移取上层清液4 mL于另一 15 mL 离心管中，45℃水浴氮吹至干，用甲醇定容至 1mL，过 0.22 µm 尼龙滤膜供上机测试。
三、标曲配制
称取空白豆芽样品 10.0 g 按照上述一、二步骤操作，作为空白基质提取液；分别精密量取一定量的混合标准液加入到空白基质提取液中，用甲醇定容至 1 mL，配制成适当浓度的基质混合标准工作溶液。
四、仪器条件
色谱条件
仪器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TQS Endura）
色谱柱：OSD色谱柱 (2.1 mm×50 mm, 1.8 µm)
流动相：A：5 mmol/L 乙酸铵
B：甲醇（0.1% 甲酸）
洗脱方式：梯度洗脱，见表 1
表 1 梯度洗脱程序
| 时间 /min | A/% | B/% |
| 0 | 95 | 5 |
| 2.0 | 70 | 30 |
| 3.5 | 10 | 90 |
| 4.0 | 10 | 90 |
| 4.1 | 95 | 5 |
| 5.0 | 95 | 5 |
质谱条件
离子源：HESI 电喷雾电压：3500 V
鞘气压力：35 arb 辅气压力：3 arb
离子传输管：380℃ 辅气温度：420℃
表 2 组分名称、保留时间及特征离子一览表（* 为定量离子）
| 名称 | 保留时间 /min | 母离子 | 子离子 |
| 赤霉素 | 3.22 | 344.9 | 133.0*，106.0 |
| 6- 苄基腺嘌呤 | 3.97 | 224.2 | 142.5*，238.9 |
| 4- 氯苯氧乙酸 | 3.45 | 184.8 | 161.0*，125.1 |
| 2,4- 二氯苯氧乙酸 | 3.86 | 218.9 | 126.7*，110.7 |
五、实验结果
表 3 豆芽中 4 种植物生长激素加标回收结果（25.0 µg/kg）
| 目标物 | 回收率（%） | 平均回收率（%） | RSD（%） | |||
| 1 | 2 | 3 | 4 | |||
| 赤霉素 | 96.96 | 88.74 | 96.19 | 91.44 | 93.3 | 4.2 |
| 6- 苄基腺嘌呤 | 83.47 | 86.42 | 90.84 | 83.81 | 86.1 | 3.9 |
| 4- 氯苯氧乙酸 | 93.66 | 87.35 | 89.32 | 86.91 | 89.3 | 3.4 |
| 2,4- 二氯苯氧乙酸 | 78.48 | 77.82 | 78.50 | 75.41 | 77.6 | 1.9 |
从上至下出峰顺序依次为：4- 氯苯氧乙酸、2,4- 二氯苯氧乙酸、6- 苄基腺嘌呤、赤霉素。注意事项：
1. 该实验采用 UPLC/MS/MS 检测，对部分目标物有基质抑制效应，如 6- 苄基腺嘌呤，建议配制基质混合标准工作液进行定量，校正回收率。
2. 在标准《BJS 201703》中，只取 4 mL 提取液进行净化，离心后取全部净化液氮吹复溶，但在实际操作中，离心后实际氮吹复溶的净化液体积不到 4 mL，会造成检测结果偏低，建议取 5 mL 提取液净化，再精密量取 4 mL 净化液氮吹复溶
订购信息
| 货号 | 描述 | 包装 |
| Q050025 | 4g MgSO4+1g无水醋酸钠，50 mL 离心管 | 50 支/盒 |
| Q015014 | 300mg MgSO4+100 mg C18，15 mL 离心管 | 50 支/盒 |
| YQ-CL200 | clover® 多管涡旋混匀仪 | 1 台/箱 |
| CN13N22 | 尼龙 /Φ13 mm/0.22 µm/ 有机系 | 100 个/盒 |
| CN50M45 | MCE/Φ50 mm/0.45 µm/ 水系 | 100 片 /盒 |
| CN50N22 | NL 滤膜，直径 50 mm，孔径 0.22 µm，水系 | 100 片/盒 |
| CL-BC9002 | 2 mL 蓝色聚丙烯盖，预开口，9-425 | 100 个/盒 |
| CL-SB9004 | 2 mL 螺纹棕色样品瓶，带书写处 11.6*32 mm，9-425 | 100 个/盒 |
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BJS 201703
