RNA提取常见问题分析

◆柱子堵塞： 

1. 裂解或匀浆处理不彻底。减少样品使用量，增加裂解液用量，增加匀浆和裂解 
时间。 
2. 处理样品太多。 

◆ 得率低： 

1. 裂解或匀浆处理不彻底。减少样品使用量，增加裂解液用量，增加匀浆和裂解 
时间。 
2. 处理样品太多。请参考最大处理量。 
3. RNA仍在柱上未洗出。再次洗脱，加入RNase-Free 水后，放置几分钟离心。 
4. 洗出液中有酒精。漂洗后应再次离心，尽量去除漂洗液。 
5. 未除净细胞培养液。收集细胞时，请注意尽量去除培养液。 
6. 使用RNAstore保存的细胞:未有效离心。RNAlater密度大于一般的细胞培养 
液，离心时应加大离心力，可以3000×g离心。 

◆ A260/A280比值低： 

洗脱时不使用RNase-Free 水，使用10 mM Tris.Hcl, pH 8.5作为洗脱液。 

◆ RNA降解： 

1. 提取的材料不新鲜。新鲜组织取得后应立即置于液氮中或立即放入RNAstore试 
剂中，以保证提取效果。 
2. 处理样品量过大。 
3. 污染了RNase。 虽然试剂盒中提供的缓冲液都不含RNase，但使用过程中很 
容易污染RNase，应小心操作。 

◆ DNA污染： 

1. 处理样品量过大。 
2. 有些样品本身DNA含量即较高，可使用DNase处理。得到的RNA溶液可加入 
DNase处理，处理后直接用于后续实验，也可用本试剂盒再进行一次纯化。