牛呼吸综合症病毒抗体elisa试剂盒使用说明书

 牛呼吸综合症病毒抗体elisa试剂盒使用说明书

 

随着荧光定量PCR技术的成熟和荧光定量PCR仪的普及，用传统的半定量方法检测目的基因表达量的升高或者降低，已经远远不能满足当前科研的需要，针对当前研究的热点基因，闪晶生物及时地从美国biosuper公司引进不同物种、不同基因的荧光定量PCR检测试剂盒。该试剂盒包含了目的基因和内参基因的引物、taqman探针(荧光探针)、反转录试剂、荧光定量PCR试剂、操作说明书等，用户只需将提好的RNA加入就可以进行荧光定量PCR实验，操作方便简单、适合多种荧光定量PCR仪，同时也避免了自己设计、合成引物探针的烦恼。目前主要是人、大鼠、小鼠的大部分基因，其它物种的基因需来电或来信咨询。

牛elisa试剂盒使用目的：
　　本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中呼吸综合症病毒抗体含量。

牛elisa试剂盒实验原理
　　本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中牛呼吸综合症病毒抗体水平。用纯化的牛呼吸综合症病毒抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入呼吸综合症病毒抗体，再与HRP标记的呼吸综合症病毒抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的呼吸综合症病毒抗体呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛呼吸综合症病毒抗体浓度。

牛elisa试剂盒组成
1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶
2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品（32pg/ml） 0.5ml×1瓶
3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶
4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份
5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
16pg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
8pg/ml 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
4pg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
2pg/ml 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
1pg/ml 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
温育：操作同3。
洗涤：操作同5。
显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。