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ABI 3730XL测序平台的原理及特点

浏览次数:13159 发布日期:2011-6-8  来源:上海美吉生物医药科技有限公司

Applied Biosystems 3730XL测序仪是高质量的长片段读取序列分析的测序平台,应用灵活而广泛3730XL可同时分析96个样品,该仪器采用4色荧光同时检测,可不间断24小时运行,自动灌胶,上样,电泳分离,检测及数据分析。仪器除了能够完成新基因测序工作或比较测序工作外还可进行多种片段分析,包括微卫星 DNA 分析,比较基因型分析,单核苷酸多态性 (SNP) 研究等。

                                       

ABI 3730XL测序仪

测序峰图

双脱氧链终止法原理

    双脱氧链终止法又称为Sanger法,其原理是DNA模板在DNA聚合酶、引物、四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)存在下进行复制时,在四管反应体系中分别按一定的比例引入四种双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团,ddNTP掺入链的末端时,该链就会停止延伸。如此每管反应体系中就产生了一系列长度不等的以ddNTP3端的DNA片段。反应终止后,分4个泳道进行凝胶电泳以分离长短不一的DNA片段,相邻的片段长度相差一个碱基。经放射自显影后,根据片段3’端的双脱氧核苷,便可获得合成片段的碱基排列顺序。

Sanger法测序原理图

ABI 3730XL测序仪技术原理

ABI 3730XL自动测序仪是基于毛细管电泳和荧光标记技术的DNA测序仪。基于Sanger法,3730XL测序仪拥有96道毛细管,并用荧光标记代替了同位素标记,从而大大提高了DNA测序的速度和准确性。4种双脱氧核苷酸(ddNTP)的碱基分别用不同的荧光进行标记,在通过毛细管时不同长度的DNA片段上的4种荧光基团被激光激发,发出不同颜色的荧光,被CCD检测系统识别,并直接翻译成DNA序列。

仪器特点

1. 双光束双侧激光激发,光栅分光装置和后置超薄CCD检测成像系统

2. 自动灌胶、上样、电泳分离、检测及数据分析,可连续运行24小时无需人工干预

3. 一次电泳测定96个样品,一天可跑12次测序电泳,每天的测序产率是1152个样品

4. 自动碱基识别、基因型分析与质量评分判定

5. 最新POP-7液体分离胶动态内镀毛细管壁使读序长度达1000bp以上,精确读序达800bp

6. 良好的温控装置提供了更大的温控范围(18~70)电泳温度可达70有助于去除二级结构的影响

7. 高灵敏度减少DNA和测序试剂的使用量

8. 更高的自动化减少劳力成本及人为失误的成本。

技术应用

1. 菌液、质粒、PCR产物测序

2. Fosmid/Cosmid/BAC双末端测序

3. 大片段鸟枪法测序

4. EST测序和分析

5. 步移测序

6. SNP发现和重测序

7. STR分型

 

 

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