冻存后细胞复苏的步骤及注意事项

真核细胞通常悬浮在带有血清和冷冻剂的培养基内，保存在-196°C 的液氮中。如果是商业订购的，通常储存在用干冰包裹的冻存管中。所以冻存后的细胞必须快速解冻后立即培养，以获得最大的生存能力，为了除去冻存时的添加剂， 24 小时后要更换培养基。

一、材料
培养基， 37’C 预热
培养瓶
装有70 ％乙醇的烧杯
1ml 、10ml 的移液管、移液器及移液头

二、步骤
把冻存细胞的管子在37’C 的水浴融化，快速摇动， 1分钟内使管内的细胞融化。
把融化的管子浸入装有70 ％乙醇的烧杯内，整个实验在超净台内进行。
小心打开冻存管，不要让乙醇浸入管内。
将冻存管内的细胞转移到培养瓶中，并立即加入预热的培养基。
盖好培养瓶的盖子，培养24 小时。
用新培养基替换老培养基。
继续培养2~3 天或按说明书上的建议进行操作。

三、温馨提示
1.融解的细胞必须马上培养，如果来不及培养，就保存在液氮中。
2.细胞通常冻存为1 ml 的体积，加入新的培养基至10ml 。
3.可以在融化了冻存细胞后，把细胞离心下来，并用新鲜的培养基重新悬浮细胞，这种做法只适用于那些对冻存剂敏感的细胞，或者笫二天因为有事不能更换新培养基的情况。