293 无血清培养基 FH-293F使用说明书

 
产品描述：
293 无血清培养基 适用于悬浮培养条件下的 HEK293 细胞(如 293-F,293-T,Expi-293F 等) 的高密度生长和瞬时转染表达。 培养基含有细胞生长所需的全部营养成份， 无需 添加任何添加物即可使用。(注意： 此培养基不包含抗生素以及血清)

产品特点:
瞬时转染专用培养基， 适用于 HEK293 细胞高密度悬浮培养
无蛋白、无动物源、化学成分限定
即用型完全培养基,无需添加额外成分

基础参数：

外观：	澄清透明红色液体
渗透压：	275±15 mOSM
pH:	6.9-7.4
无菌检测:	无菌
内毒素：	<5 EU/mL
储存条件：	2-8℃，避光
效期：	12 个月
产品用途：	仅用于科学研究，不适用于人类或动物的诊断和治疗

 
产品使用方法：

细胞驯化
1)直接驯化
大部分情况下，培养于其他培养基中的细胞， 可以直接适应 FH-293F ，只要按照日常传代方 式(稀释)更换培养基即可。

2)渐进式驯化
注意：选用低代次、处于对数生长期的细胞进行驯化
① 原培养基中复苏细胞并继续使用该培养基传代 2 到 3 次至细胞生长稳定，当细胞密度达到 2x10 6 cells/ml 后进行传代，传代细胞密度控制在 0.5-0.6×10 6 cells/mL，5-10% 血清的传统培养基或其他无血清培养基与 FH-293F 的比例为 75:25；
②将细胞置于 37℃， 5% CO2，转速为 110-175 rpm 的恒温摇床中进行培养；
③当细胞密度 3-4 天后达到 3x10 6  cells/ml 且细胞活率>90%，传代时 5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与 293培养基 的比例为 50:50，细胞密度控制在 0.5×10 6  cells/   mL。如细胞生长慢，可离心上清， 留 20%条件培养基，加入 80%的 5-10%血清的传统培养基或其 他无血清培养基与 FH-293F 培养基 比例为 75:25 的混合培养基，继续培养；
④重复步骤③逐步增加FH-293F 所占的比例(5-10%血清的传统培养基或其他无血清培养基与 FH-293F 的比例为 25:75 至 10:90)直到 100%的 UP1000 无血清培养基；
⑤经过在 100%的 FH-293F 无血清培养基中的几次传代培养， 传代后 3-4 天细胞的密度可以达 到 2-3×10 6    cells/mL，细胞活率大于 90%，这说明细胞已经完全适应了FH-293F 无血清培养基。 之后进行细胞的传代培养时，细胞的起始密度可以降到 0.3×10 6 cells/mL，一般传代 2-3 次后 再进行转染实验。
注意: 一般细胞驯化过程中，前三代细胞的状态可能不是很好，但一般从第四代状态会有改 善。

细胞传代
1)取细胞培养样品，人工或仪器测定细胞密度以及活率；
2)计算传代所需的细胞用量，建议起始细胞密度为 0.2-0.4×10 6  cells/mL。建议复苏的 细胞至少培养两代后再用于其他用途。传代培养体积建议为 15-20 mL(100 mL 的培养瓶)或 50-60 mL (250 mL 的培养瓶)；
3)将细胞置于 37℃，5%CO2，转速为 110-175 rpm 的恒温摇床中进行培养，3-4 天传代一次。
细胞转染在 FH-293F 无血清培养基中， 采用商业化转染试剂(例如 Gibco 293Fectin™ ExpiFectamine™ 293 Transfection Kit )  可以实现对 HEK293 细胞的高效转染。