通用型细胞周期流式细胞分析试剂盒产品说明书

通用型细胞周期流式细胞分析试剂盒产品说明书（中文版）
 
主要用途
 
通用型细胞周期流式细胞分析试剂是一种旨在通过细胞流式仪测定细胞中DNA结合染料程度，来定量DNA含量，以进一步获取细胞周期分布状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞（动物、人体、植物、昆虫等）的细胞周期分析。可以被用于细胞凋亡、信号传递、细胞分裂、代谢等的研究。产品严格无菌，即到即用，分辨率高，操作简捷，性能稳定。
 通用型细胞周期流式细胞分析试剂盒产品说明书
技术背景
 
细胞周期是评价细胞代谢、生理和病理状况的重要指标。通过DNA结合染料，借助细胞流式仪，测定出DNA含量，根据DNA含量随着细胞周期的不同而发生变化，来确定和区别细胞周期的不同阶段。流式细胞术（FLOW CYTOMETRY）是七十年代发展起来的集计算机、激光、流体力学、细胞化学、细胞免疫学为一体的高科学技术。凋亡细胞是在正常G0/G1峰细胞群前出现亚二倍体峰（sub-G1）细胞群。
 通用型细胞周期流式细胞分析试剂盒产品说明书
产品内容
 
清理液（ A）     100毫升
裂解液（ B） 50毫升
染色液（ C）     650微升
去干扰剂（ D）  1毫升
保存液（ E） 50毫升
产品说明书  1份
 
保存方法
 
保存去干扰剂（ D）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；染色液（ C）避免光照，有效保证6月
 
用户自备
 
HANKS平衡盐溶液（12022）或PBS缓冲溶液（12033）：用于清洗细胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（12024）：用于细胞脱离
完全细胞培养液（12052）：用于中和胰蛋白酶的处理
15毫升锥形离心管：用于细胞收集的操作
1.5毫升离心管：用于细胞染色的容器
台式离心机：用于细胞收集的操作
细胞流式仪：用于细胞荧光分析
 
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实验步骤
 
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的去干扰剂（ D）置入冰槽里融化。移出500微升裂解液（ B）到新的1.5毫升离心管，加入2.5微升染色液（ C）和10微升去干扰剂（ D），混匀后标记为1号工作液；再移出500微升保存液（ E）到新的1.5毫升离心管，加入4微升染色液（ C），混匀后标记为2号工作液。工作液置于暗室里，避免光照。然后进行下列操作。
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• 准备1瓶25cm²细胞培养瓶的待测细胞，铺满率达70％（约1百万细胞数）
• 小心移出细胞培养液到15毫升锥形离心管（收集漂浮细胞）
• 加入2.5毫升用户自备的HANKS平衡盐溶液或PBS缓冲溶液到细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面
• 小心移出2.5毫升清洗液到上述15毫升锥形离心管
• 加入1毫升胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液到细胞培养瓶，铺满整个培养平面
• 置入37℃培养箱1分种
• 振动培养瓶，使细胞脱落，然后加入5毫升用户自备的完全细胞培养液
• 移入到上述15毫升锥形离心管（悬浮细胞从这一步骤开始）
• 放进台式离心机离心5分钟，速度为300g
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升清理液（ A）到15毫升锥形离心管，混匀
• 放进台式离心机离心5分钟，速度为300g
• 小心抽去上清液
• 加入500微升1号工作液，用200微升枪头上下轻柔抽吸，混匀细胞颗粒群（可以移入到1.5毫升离心管或细胞流式仪专用测试管）
• 在暗室里室温下孵育60分钟
• 加入500微升2号工作液，用200微升枪头上下轻柔抽吸，混匀
• 移入到细胞流式仪专用测试管（可放进4℃冰箱里待测）
• 即刻进行细胞流式仪分析：波长488nm氩离子激光（或488nm激发波长，610nm散发波长），观察50000个细胞以上

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