一级菌种培养基的制备实验！
一级菌种培养基的制备实验！
一、实验目的
1．了解一级菌种培养基配制的原则；
2．掌握一级菌种培养基配制的工艺流程；
3．学会一级菌种培养基配制的具体方法步骤；
4．学会棉塞的制作方法和手提式高压蒸汽锅的使用方法。
二、实验设备、工具和材料
手提式高压锅、1000～1500W电炉、感量1／10g的粗天平、1000mL量杯、玻璃漏斗、漏斗架各一个，8～10cm长乳胶管一根，止流夹一个，20mm×200mm试管150支左右，铁丝筒两个，小刀和剪子一把，普通棉花250g，牛皮纸、马铃薯、琼脂和葡萄糖或蔗糖适量。
三、实验步骤
(1)取适量马铃薯，削去皮，挖去芽眼。称取200g，切成薄片或小块，用清水淘洗之后，放入锅内，加水1200mL，用文火煮沸20～30min，用四层纱布过滤，取滤液1000mL，如不足加水补足1000mL。
(2)称取琼脂20g，洗净剪碎，加入马铃薯煮出液中，用文火加热，边煮边搅拌，直至全部琼脂融化，再用四层纱布过滤，并用热水补足1000mL，加入预先溶解的葡萄糖水，搅拌之后煮2min后停火。
(3)分装试管。根据要求，用1%盐酸或1%氢氧化钠溶液调整酸碱度后，将培养基趁热分装在试管中。
先在玻璃漏斗嘴上套一段长8～10cm的乳胶管，卡上止流夹，将培养基倒入漏斗中（其余培养基要置电炉上保温）。左手握住3～5支试管，让乳胶管伸入试管中部，右手拇指和食指按下止流夹，逐一注入培养基，装入量以试管长度的1/5～1／4为宜。分装时不要让培养基沾在试管口上，若已沾上，要用干净纱布擦干净。
(4)塞棉塞。培养基分装试管后，要塞上棉塞。
制作棉塞的方法很多，这里介绍一种常用的方法。取适量棉片，在桌上铺成长12～15cm，宽12cm左右的薄棉垫，先将棉垫下部1／3向上折叠，再将上部1／3向下折叠，然后将长棉垫逆时针方向转90°，让光滑的一边向左用右手持棉垫并用拇指按住，左手拇指和食指向外旋卷，并将参差不齐的棉纤维缠住呈一圆柱形。用右手按顺时针方向将棉塞塞进管口内，塞入部分为棉塞长度的2/3。
(5)捆扎试管。塞好棉塞之后，应将试管捆成束，并用牛皮纸将棉塞部分包扎好，装进高压锅内灭菌。
(6)灭菌。用手提式高压蒸汽灭菌锅灭菌。其步骤如下。
①加水。先向锅内加水，略超过支架。
②装锅。将包扎好的试管直立放在内筒中，不要装得过紧、过满。
③关严锅盖。先将软管对好内筒插孔，盖严锅盖，对角旋紧旋钮。
④加热。插上电炉插头或推上电闸加热。
⑤排放冷空气。开始加热时将放气阀打开，待看到有大量蒸汽排出后关上放气阀。
⑥升压保压。排放冷空气之后，继续加热，当压力表指针达到0.11MPa时，开始计时，维持30min。
⑦降压排气。维持30min之后，拔下电源插头或拉开电闸，使其自然冷却，或从电炉上把锅提下来，待压力表指针降到零时，打开放气阀，排放蒸汽。
⑧出锅。排完气后，松开旋钮，将锅盖揭开一小缝，待培养基温度降至60℃左右时，取出试管。
⑨摆斜面。试管从锅内取出后，要将试管一支一支地散放在桌面上的小木条上，使之冷却成斜面。斜面长度为试管长度的2/3。
(7)空白实验。将灭菌后的斜面试管，各组随机抽取几支，放在28～32℃温箱中空白培养48～72h，如无任何杂菌生长，说明灭菌彻底，才可使用。
北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。
http://www.biobw.com/
一、实验目的
1．了解一级菌种培养基配制的原则；
2．掌握一级菌种培养基配制的工艺流程；
3．学会一级菌种培养基配制的具体方法步骤；
4．学会棉塞的制作方法和手提式高压蒸汽锅的使用方法。
二、实验设备、工具和材料
手提式高压锅、1000～1500W电炉、感量1／10g的粗天平、1000mL量杯、玻璃漏斗、漏斗架各一个，8～10cm长乳胶管一根，止流夹一个，20mm×200mm试管150支左右，铁丝筒两个，小刀和剪子一把，普通棉花250g，牛皮纸、马铃薯、琼脂和葡萄糖或蔗糖适量。
三、实验步骤
(1)取适量马铃薯，削去皮，挖去芽眼。称取200g，切成薄片或小块，用清水淘洗之后，放入锅内，加水1200mL，用文火煮沸20～30min，用四层纱布过滤，取滤液1000mL，如不足加水补足1000mL。
(2)称取琼脂20g，洗净剪碎，加入马铃薯煮出液中，用文火加热，边煮边搅拌，直至全部琼脂融化，再用四层纱布过滤，并用热水补足1000mL，加入预先溶解的葡萄糖水，搅拌之后煮2min后停火。
(3)分装试管。根据要求，用1%盐酸或1%氢氧化钠溶液调整酸碱度后，将培养基趁热分装在试管中。
先在玻璃漏斗嘴上套一段长8～10cm的乳胶管，卡上止流夹，将培养基倒入漏斗中（其余培养基要置电炉上保温）。左手握住3～5支试管，让乳胶管伸入试管中部，右手拇指和食指按下止流夹，逐一注入培养基，装入量以试管长度的1/5～1／4为宜。分装时不要让培养基沾在试管口上，若已沾上，要用干净纱布擦干净。
(4)塞棉塞。培养基分装试管后，要塞上棉塞。
制作棉塞的方法很多，这里介绍一种常用的方法。取适量棉片，在桌上铺成长12～15cm，宽12cm左右的薄棉垫，先将棉垫下部1／3向上折叠，再将上部1／3向下折叠，然后将长棉垫逆时针方向转90°，让光滑的一边向左用右手持棉垫并用拇指按住，左手拇指和食指向外旋卷，并将参差不齐的棉纤维缠住呈一圆柱形。用右手按顺时针方向将棉塞塞进管口内，塞入部分为棉塞长度的2/3。
(5)捆扎试管。塞好棉塞之后，应将试管捆成束，并用牛皮纸将棉塞部分包扎好，装进高压锅内灭菌。
(6)灭菌。用手提式高压蒸汽灭菌锅灭菌。其步骤如下。
①加水。先向锅内加水，略超过支架。
②装锅。将包扎好的试管直立放在内筒中，不要装得过紧、过满。
③关严锅盖。先将软管对好内筒插孔，盖严锅盖，对角旋紧旋钮。
④加热。插上电炉插头或推上电闸加热。
⑤排放冷空气。开始加热时将放气阀打开，待看到有大量蒸汽排出后关上放气阀。
⑥升压保压。排放冷空气之后，继续加热，当压力表指针达到0.11MPa时，开始计时，维持30min。
⑦降压排气。维持30min之后，拔下电源插头或拉开电闸，使其自然冷却，或从电炉上把锅提下来，待压力表指针降到零时，打开放气阀，排放蒸汽。
⑧出锅。排完气后，松开旋钮，将锅盖揭开一小缝，待培养基温度降至60℃左右时，取出试管。
⑨摆斜面。试管从锅内取出后，要将试管一支一支地散放在桌面上的小木条上，使之冷却成斜面。斜面长度为试管长度的2/3。
(7)空白实验。将灭菌后的斜面试管，各组随机抽取几支，放在28～32℃温箱中空白培养48～72h，如无任何杂菌生长，说明灭菌彻底，才可使用。
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