对虾白斑综合症病毒（WSSV）核酸检测试剂盒（恒温荧光法）使用说明

请于-20℃条件下保存，有效期 12 个月

◆产品说明

动物疫病检测系列基于独特的恒温荧光检测技术，可针对食品、动物组织等样品中病毒的特异核酸

片段进行扩增，通过实时扩增曲线判定结果。本产品用于对虾白斑综合症病毒（ WSSV ）的检测，检出限为

10²copies/μL 病毒基因组 DNA。

◆产品组成（ 48 测试） 

◆适用仪器

ZYD-S1、ESE Tube Scanner、Genie II、Deaou-308c 等恒温荧光检测仪， ABI 7500，LightCycler480，CFX 96

等荧光 PCR 仪。

◆自备耗材和仪器

①灭菌 1.5mL 或 2.0mL 离心管；②灭菌 0.2mL PCR 管或八联管；③冰盒；④移液器（1-10μL，10-100μL，100-1000μL）

及配套灭菌吸头；⑤离心机；⑥涡旋混匀器；⑦金属浴。

◆注意事项

1．本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。

1）第一区：试剂准备区。

2）第二区：样本制备区。

3）第三区：扩增及产物检测区。

★分区之间最好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。

2. 实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，使用移液器，试验产生的所有废弃物及时处理。

3．严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰上操作。

4．反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心 30

秒，并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。

5．反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。

6．不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。

◆样品处理

参照《SN/T 1151.2-2011 对虾白斑病检疫技术规范》或其他标准处理样品，制备的样本保存待用。详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。

◆实验操作

将试剂完全解冻，各组分离心 30s。

1.试剂配制（试剂准备区，放置于冰盒中进行）：

若有 N 个待检样品，则参照下表，按照 N+2 个数量计算各组分用量（N 个待检样品+1 个阴性对照+1 个阳性对照），将下表中试剂在 EP 管中涡旋混匀，离心 30 秒，分装于 0.2mL PCR 管中，并向每管加入 1 滴 C-I（约 20μL）。

2．模板制备（样本制备区）

建议使用配套水生动物病毒基因组 DNA 提取试剂盒系列产品。

3．添加模板（样本制备区，放置于冰盒中进行）

在步骤 1 中已含有反应液的 PCR 管中加入 10μL 模板，顺序为 NG-I、待测样品模板、PG-WSSV-I。涡旋混匀30s，离心 1min，立即进行扩增反应。

4.  扩增反应63℃条件下反应 60 min。若使用荧光定量 PCR 仪，则荧光基团选择 FAM，淬灭基团选择 None，将 63℃ 15 s，63℃ 45 s 作为一个循环，于 63℃ 45 s 处收集荧光信号，60 个循环。

其他仪器请参照仪器说明书进行设置。

◆结果判定

仪器自动判定结果，若显示“阳性”，则样品中含有对虾白斑综合症病毒（WSSV）；若显示“阴性”，则样品中不含有对虾白斑综合症病毒（WSSV）或含量低于检测限。

NG 反应管结果显示“阴性”，PG 反应管结果显示“阳性”，此次检测结果有效，否则无效。如重复检测结果仍为无效，请与技术支持人员联系。