脐血MSCs的分离
脐血MSCs的分离
试剂和材料：
1. 培养基；
2. 0.05%胰蛋白酶，含EDTA；
3. PBSA；
4. T25；
实验方法：
1. 为了获得新鲜制备的CB-MNCs，按密度梯度分离法分离单个核细胞（MNCs）；
2. 用培养基重悬新鲜分离或冻存的MNCs。冻存的MNCs在铺板前要37℃迅速复苏并用培养基洗一遍；
3. 将重悬在培养基的CB-MNCs接种到T25的培养瓶，接种密度为3×105 个细胞/cm2；
4. 将细胞放入37℃ 5%CO2的培养箱中；
5. 每7天更换一次培养基，直到贴壁生长的成纤维细胞样的细胞达到汇合；
6. 一旦达到汇合，用0.05%胰蛋白酶/EDTA处理5min，重悬细胞，然后将细胞按1×105 个/瓶重新接种；
7. 达到细胞汇合后，用培养基按1：5稀释后再接种培养；
标签：
原代细胞
