原代细胞骨架的染色方法

 

微丝的显示方法步骤：

1.    用PBS液漂洗盖片培养的原代细胞3次，每次30s；

2.    用2%的甲醛/PBS液固定原代细胞3min；

3.    用0.5%的三硝基甲苯/PBS处理3次，每次10min；

4.    PBS漂洗3次；

5.    用罗丹明（rhodamine）标记的鬼笔环肽（phalloidin）（1：10）室温中反应15min；

6.    PBS漂洗3次；

7.    60%甘油+荧光防淬剂封片；

8.    荧光显微镜观察；

 

微管的显示方法：

1.    用PBS液漂洗盖玻片的原代细胞3次，每次30s；

2.    在室温中用3%甲醛/PBS固定20min；

3.    用PBS液再漂洗3次，每次1min，最后用滤纸吸干多余的PBS液；

4.    投入冷丙酮中（-10—-20℃）7min；

5.    用PBS漂洗3次，每次1min，最后用滤纸吸干多余的PBS液；

6.    向直径6cm的干净碟皿中央滴一滴浓度为0.1—0.2mg/ml的一级抗微管蛋白抗体，令小盖片细胞面向下扣在抗体液上，覆以皿盖，于37℃温箱中放置45min—1h；

7.    向碟皿内匀速缓慢滴加PBS，令盖片浮起在液面，用镊子夹出，按步骤3处理；

8.    向干净碟皿中央滴一滴浓度为0.1—0.2mg/ml的荧光标记的二抗，其后操作按步骤6进行；

9.    按步骤7和3操作；

10.滴pH8.5的90%的甘油/PBS少许于载玻片上，把小盖片的原代细胞面覆在大盖片上；

11.将盖片置于荧光显微镜下观察；