基因合成是指在体外合成双链DNA分子的一门技术,与寡核苷酸合成有所不同,寡核苷酸是单链的,所能合成的最长片段仅为100nt左右,而基因合成则为双链DNA分子合成,所能合成的长度范围50bp-12kb。
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一、应用领域:
1.基因突变 / 重组 / 高效表达
2.其他方法难以获得的 cDNA
3.合成不同的基因变异或新基因
4.用于微芯片的大量 cDNA
二、服务特色:
1. 免费提供基因的参考设计方案,包括设计酶切位点,密码子优化等
2. 基因合成周期短,严格按照与用户签定的基因合成服务协议和保密合同执行
3. 能合成长度达 10 kb 的基因
4. 基因克隆到用户指定或提供的表达载体上
5. 质量可靠,提供 DNA 测序结果,保证所合成的基因序列 100% 准确
三、服务流程:
收到客户提供序列后,确定使用何种酶切位点克隆,克隆到何种载体等等,然后对全序列进行编辑,传至客户确认
经分析确认达成一致意见后,签订基因合成服务协议与保密合同。
设计Oligo合成方案,在全自动合成仪器上进行单链的化学合成
通过OVER-LAP的PCR,把单链Oligo拼接成双链的全长基因
将PCR产物酶切、纯化,连接到质粒中,将质粒转入细胞株培养
提取阳性克隆进行DNA测序,确认插入片段的准确性
对可能存在的错误位点用定点突变的方法加以改正,再经测序验证
提供实验报告,包括装载目的基因的质粒、细菌株、测序图谱/序列
合成完毕后,本公司通知客户,收到全部货款,本公司开始发货
四、情况说明
1、由于基因结构的复杂性,并不是所有的片段都能顺利合成。对于较长的片段或一些复杂结构如重复序列、高 GC 片段等,可能会需要额外的时间调整合成方案。如果发生这种情况,技术人员会及时与您联系,告知您合成进程。
2、所合成的基因一般克隆于通用载体中,如需克隆在客户指定的载体中,我公司会酌情再收取一定的费用,并且交货时间会适当延长。
五、密码子优化:
对于密码子优化服务,在提供需要优化和合成的基因序列的同时,我们还需要如下讯息:
1. 需要合成的蛋白或 DNA 序列
2. 宿主表达系统
3. 两端的限制性酶切位点
4. 优化后的序列中需要避免的限制性酶切位点
5. 优化后的序列中需要保留的限制性酶切位点
六、交付技术资料与产品
1、不少于2ug的含目的基因的通用载体质粒一份
2、含上述质粒的大肠杆菌菌株一份
3、基因序列100%正确的原始报告测序正本一份
4、基因合成报告一份
七:全基因合成服务要求
1. 请将您需要合成的基因全序列以 E-mail 或传真的形式告知公司的业务员或公司的技术员。
2. 请说明实验的具体要求,如:使用何种酶切位点进行克隆以及需克隆于何种载体等。
3. 测序结果如果发现有错误位点,我们会采取相应的技术手段进行修复校对,保证整个序列的正确性。
4. 提供实验结果:包括实验操作规程、测序结果、测序彩色峰图、含有合成基因的质粒及含该质粒的菌体( 穿刺菌 )等。