Oligo DNA的人工化学合成始于50年代初期,1980年,全自动的固相DNA合成仪面市后,推动了生物工程技术的蓬勃发展。
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引物合成的原理
引物合成现在一般都采用亚磷酰胺化学合成Oligo DNA片段,具有快速偶联以及起始反应物比较稳定的特点。该方法是在固相载体上完成DNA链的合成的,合成时从3"→5"方向进行,通常3"端的第一个碱基结合在Glass担体(Controlled Pore Glass,CPG)上。Oligo DNA合成的原理基本相同,主要差别在于合成产率的高低、试剂消耗量和单个循环用时的不同。我公司采用的合成仪主要机型为ABI3900高通量合成仪。
合成的详细过程见图1,现简要说明如下:
图1 Oligo DNA合成原理图。N1代表第一个碱基,N2代表第二个碱基,依次类推。
引物合成过程中可以观察TCA处理阶段的颜色判定合成效率。连接在CPG上的引物被切下来,通过, PAGE等手段纯化引物,成品引物用C18浓缩、脱盐,测定OD260定量,根据订单要求分装。
引物合成项目表
(一)常规合成(≤60bp)
(二)长链合成(>60bp)
(三)硫代修饰(SPO3)
(四)特殊碱基