 |
倍沃医学拥有专业的技术人员，和自主研发、洁净车间生产的专利试剂盒，为您提供最可靠的服务。
|
|||||||||||||||||
| [发表评论] [本类其他服务] [本类其他服务商] | ||||||||||||||||||
| 服务商： 杭州倍沃医学科技有限公司 | 查看该公司所有服务 >> |
倍沃拥有专业的技术人员，和自主研发、洁净车间生产的专利试剂盒，为您提供最可靠的服务。
由于RNA样品易受环境因素特别是RNA酶的影响而降解，提取高质量的RNA样品在生命科研中具有相当的挑战性。RNA提取对样品的新鲜性要求非常高，获取样品后最好立即提取RNA，若无条件立即实验，应于-80℃或液氮中保存样品，提取时取出样品后立即在低温下研磨裂解细胞，以防RNA降解。
目前普遍使用的RNA提取法有两种：基于异硫氰酸胍/苯酚混合试剂的液相提取法（即Biozol类试剂）和基于硅胶膜特异性吸附的离心柱提取法。
1、异硫氰酸胍/苯酚混合试剂的液相提取法
试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚，其中异硫氰酸胍可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。细胞裂解之后要看不见颗粒状物质（结缔组织和骨除外）。在清洗和裂解细胞时不需要在低温下操作，及时在操作过程中释放的内源RNase，也会被TRIZOL中的强变性剂所抑制。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层（无色）主要为RNA，有机层（黄色）主要为DNA和蛋白质。Biomiga提供的Biozol溶液即基本基于这一原理。
2、硅胶膜特异性吸附的离心柱提取法
采用一系列裂解液裂解组织、细胞，抑制RNA酶，释放RNA，调节结合条件之后，硅胶膜特异性吸附RNA，多次漂洗去除DNA、蛋白质及其他杂质，最后经低盐溶液洗脱得到RNA。
溶液的主要成分为胍盐，对于某些次生物质含量丰富的多糖多酚类植物组织，比如棉花和葡萄叶子，Biomiga在常规胍盐的基础上进行了改进，添加了一些对多糖多酚类物质结合力很强的成分，像Plantaid可以高效结合多糖多酚，然后在离心的过程中去除。
Biomiga公司提供产品采用离心柱法，操作简便、快速、不含有毒有害物质。其提取步骤分为样品处理、细胞裂解、RNA纯化三个方面。
实验步骤：
样品处理：
样品材料进行破碎（及匀浆）可以提高裂解效率，组织破碎后可以充分与裂解液接触，利于裂解。不同来源的组织材料，根据组织成份的差异，样品处理的方式也有所差异。一般来说，样品的破碎方式，主要有液氮研磨、匀浆和蛋白酶K消化。
1）植物和真菌:液氮研磨，也可以加入裂解液后快速匀浆；
2）动物组织：匀浆，液氮研磨，加热，部分组织如肝脏，可加入蛋白酶K进行裂解；
3）革兰氏阴性菌与细胞：直接裂解；
4）革兰氏阳性菌酵母：玻璃珠和酶破壁
细胞裂解：
样品经液氮研磨或匀浆之后，加入裂解液裂解细胞，抑制RNA酶，释放RNA，经吸附、漂洗、洗脱后得到高质量RNA。
RNA纯化：
DNA去除可以用DNase I消化，也可以使用Biomiga独特的DNA Clean Column，可以简单告诉地去除绝大部分基因组DNA。
服务内容及价格：
我们使用进口优质试剂盒，洁净空间操作，提取的总RNA可以满足southern blot以及qPCR等高标准实验要求，如果您的样品数量较多，请联系技术支持人员，享受折扣优惠！
服务说明：
具体问题欢迎与我们技术人员联系400-115-2855。
