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利用限制性内切酶对基因组进行酶切，富集启动子及CpG岛区域，进行Bisulfite处理及片段富集并制备高质量文库，然后使用Illumina测序平台进行高通量测序的表观遗传学研究方法
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简化甲基化测序（Reduced Representation Bisulfite Sequencing，RRBS）是利用限制性内切酶对基因组进行酶切，富集启动子及CpG岛区域，进行Bisulfite处理及片段富集并制备高质量文库，然后使用Illumina测序平台进行高通量测序的表观遗传学研究方法。
产品优势
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◇ 技术稳定：多样本的覆盖区域重复性高，适用于多样本间的差异分析。 |
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◇ 实验高效：重亚硫酸盐转化效率>99%，自主研发的酶极大提高扩增效率，提高文库制备的稳定性。 |
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◇ 高分辨率：单碱基分辨率。 |
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◇ 高性价比：相比于WGBS，测序区域更有针对性，数据利用率更高，性价比更高。 |
技术路线
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样本要求 |
DNA≥3 μg（浓度≥25 ng/μL），新鲜组织≥20 mg，全血（提取基因组DNA）≥1 mL，干血片≥10片（1 cm2面积），唾液≥3 mL，口腔拭子≥2根，新鲜培养细胞≥8*106个、FFPE（石蜡切片）≥10片（1 cm2面积，5-10 μm） |
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测序策略 |
PE150，数据量：5G raw data |
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服务周期 |
30个自然日 |
文献案例
发表杂志：Clinical Cancer Research IF：10.199 发表年份：2018
IDH1/2突变型胶质瘤具有独特的CpG岛甲基化谱（G-CIMP），这种独特的甲基化状态可通过沉默肿瘤抑制基因来促进继发途径胶质瘤的起始和进展。肿瘤抑制性miRNA在该过程中的潜在作用尚不清楚。为了定胶质瘤中潜在的抑癌miRNA，作者首先通过简化甲基化测序（RRBS）的方法对219例IDH-1野生型及72例IDH-1突变型胶质瘤组织标本进行了甲基化检测，并比较了11例IDH-1野生型及20例IDH-1突变型的甲基化谱。随后用qPCR方法检测所选miRNAs的表达，筛选出对miRNA-148a进行了功能分析，并对miRNA-148a的靶基因进行了鉴定。结果显示，miR148a是新发现的胶质瘤CpG岛甲基化表型相关miRNA，miR148a的甲基化与IDH-1突变密切相关，并与改善恶性胶质瘤患者的生存率有关。同时，实验表明DNA甲基化可导致miR148a表达量降低。IDH1突变研究也为miR148a的甲基化及表达下调提供了一种新的可能的机制。miR148a表达下降有所缓解时，胶质瘤细胞的致癌性降低了，研究者推测可能是通过影响DNMT1造成的。
图1 G-CIMP中甲基化miRNAs的发现
参考文献
Li S, Chowdhury R, Liu F, et al. Tumor-suppressive miR148a is silenced by CpG island hypermethylation in IDH1-mutant gliomas.[J]. Clinical Cancer Research An Official Journal of the American Association for Cancer Research, 2014, 20(22):5808.
