基因表达量检测

介绍

  荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出，由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前已得到广泛应用。 荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时监控反应过程。随着PCR 反应的进行，反应产物不断累积，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一次荧光强度信号，这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，结合相应的软件对产物进行分析，可以得到荧光扩增曲线，计算待测样品初始模版的量。实时荧光定量PCR技术是一次由定性技术向定量技术的飞跃，运用该项技术，可以对DNA、RNA样品进行相对定量、绝对定量和定性分析。

检测分类

1. mRNA表达量水平检测：相对定量法。
2. MicroRNA表达量水平检测：通过设计特殊茎环结构的反转录引物，结合实时定量PCR可以精确检测微量样品中microRNA表达水平。内参基因一般用U6。 
3. 基因拷贝数检测：如检测样品中不同细菌含量、基因工程菌目的基因拷贝数、环境中耐药基因检测等。采用绝对定量法。

定量方式

1. 绝对定量：用已知浓度的标准品绘制标准曲线，而后通过标准曲线对未知浓度的检测样品进行绝对量（起始拷贝数）分析。
2. 相对定量：以内参基因为参照，比较两个或两个以上样本中某个基因表达量的变化，通常用来对mRNA表达量进行分析。一般采用2－ΔΔ Ct  法进行计算。每个样本重复三次。

检测方式

1. SYBR Green Ⅰ法：

         在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

2. TaqMan探针法：

        探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。

样品要求

■ 须提供新鲜的足量材料（细胞数106个以上，组织100 mg以上），样品-70℃快递至本公司（干冰或液氮运送，以保证样品质量），亦可提供保证质量的DNA或RNA样品（2 μg以上）；

■ 提供靶基因信息，包括基因序列或GenBank Accession Number等；

■ 提供详细的背景资料，生物物种信息（Human、Mouse、Rat等）、DNA/RNA来源、基因丰度等。

提供结果

引物和探针及序列，胶图，原始数据（包括扩增曲线和熔解曲线）、数据分析结果及实验报告。

检测周期

常规检测任务2－3周内完成，具体情况根据要检测的基因和样本数而定。

上海吉真生物科技有限公司是一家致力于分子生物学检测方法与技术的推广普及，集基因分型、基因表达量检测、表观遗传学分析、精准医疗为一体的高科技企业。
公司立足于现代人类基因组学、营养基因组学、药物基因组学、肿瘤基因组学研究的最前沿，历经多年的市场调查、技术准备和产品研发。公司技术力量雄厚，具有科学研发、产品设计、生产销售、基因检测、健康管理、精准医疗、技术服务为一体的运营体系。公司拥有多项核心技术成果，产品市场需求旺盛，是一家高速成长型企业。
公司的工作宗旨是将具有实际用途的科学研究成果高效地转化为能够为广大人群服务的产品，推向市场，推进高科技成果的产业化，缩短科学研究回报社会的时间与距离，让每位消费者感受到高科技为个人健康带来的成效，积极为促进国民健康做贡献！