微生物全基因组测序;细菌de novo;细菌重测序
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技术简介
随着第二代高通量测序技术的迅猛发展,全基因组测序已经成为细菌基因组研究不可或缺的重要工具。第二代高通量测序技术大大降低了细菌基因组研究的成本,缩短了研究周期,为越来越多的科研人员提供了便利。微生物基因组测序根据客户需求可获得框架图、精细图和完成图。其中完成图采用第三代单分子测序(PacBio)和第二代高通量测序结果进行拼接和组装;精细图根据第二代高通量测序的结果进行拼接和组装。重测序结果可进行功能基因分析(如耐药基因分析)、进化分析、毒力分析等,为后续的功能研究提供理论基础。
技术优势
文库构建标准化:标准化的建库流程,使文库质量更稳定;
优化的建库流程:优化后的建库流程降低了对初始DNA样本质量要求,增加了插入片段文库的选择,使所得数据更有利于后期的数据分析;
初始样本微量化:初始DNA量可以降低到500 pg;
数据分析内容灵活:可以根据客户需求,调整分析内容;
个性化的跟踪分析:根据客户需求进行数据的后期跟踪分析,专家团队的加入使数据分析方向更明确。
技术路线图
生物信息学分析
细菌基因组从头测序(de novo sequencing)
常规分析:
1.测序数据质控分析
2.高质量序列的拼接和组装
3.基因预测及功能注释
4.蛋白结构域注释
5.各类ncRNA、CRISPR、重复序列和转座子等预测
6.生化反应通路(PATHWAY)映射
7.基因本体论(GO)注释
高级分析:
8.前噬菌体分析
9.致病性分析
10.进化分析:包括构建系统发育树,计算进化速率
11.共线性及共有基因分析
12.基因家族分析
个性化分析:
13.根据客户需求进行个性化定制分析
细菌基因组重测序
常规分析:
1.测序数据质控分析
2.一致性序列组装(与参考基因组序列比对分析)
3.单核苷酸多态性位点检测
4.基因拷贝数变化分析
5.结构变异位点检测
6.系统发育树构建
高级分析:
7.进化速率分析
8.群体进化分析
个性化分析:
9.根据客户需求进行个性化定制分析
案例解析
微生物基因组测序圈图
绿硫菌(C. tepidum)全基因组序列环形展示图标明其正负链序列的编码区域信息,揭示GC skew、基因组的平均GC含量、三核苷酸组成、tRNA基因、rRNA基因和sRNA基因种类等基本特征。
系统发育分析
利用31个广泛使用的保守蛋白编码基因构建细菌域的最大似然系统发育树,揭示GEBA基因组的分类特征及与其他物种的亲缘关系。
测序策略及数据量
测序策略:PE100、PE150
建议数据量:1Gb