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BIOTREE提供miRNA实时荧光定量PCR全面解决方案，全程与您沟通或帮您设计实验,我们为您完成所有的实验操作，提供完整的实验报告和数据分析报告。
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| 服务商： 上海阿趣生物科技有限公司 | 查看该公司所有服务 >> |
一、技术路线
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样品RNA提取 |
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样品质量检测
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数据分析
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反转录
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特异性引物设计
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荧光定量PCR检测
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样品收集
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二、技术方法
2.1 样本miRNA提取
所需样本量：细胞（≥106）、组织（≥300mg）、血液（≥2ml）、血清（≥1.5ml）等样品材料，总RNA（≥20μl，浓度≥ 50ng/μl）；
样本保存：组织样本请保存在-80ºC或保存在Trizol中（液氮研磨后）或保存在RNAlater中（动物组织）；
样品运输：用冻存管保存，并用干冰或液氮运输。
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相关技术服务
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服务项目
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内容说明
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RNA提取
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从血液、组织、叶片等样本材料中提取总RNA
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血清RNA提取
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从1-5ml血清中提取总RNA
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石蜡包埋组织RNA提取
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从石蜡包埋的组织块中提取总RNA
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miRNA提取
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从细胞、血液、组织、叶片等多种样本材料中（石蜡包埋组织样本除外）提取是small RNA(<200nt)，miRNA纯度、丰度更高。
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2.2 样本质量检测
如果客户给的样本是已提取好的总RNA，需满足以下条件：
完整性：1.2%琼脂糖凝胶电泳出现两条带（28s、18s RNA），其中28s RNA条带的亮度是18s RNA条带亮度的1.5~2.0倍，否则说明RNA出现了降解。如果出现弥散片状或者条带缺失，则说明RNA样本出现严重降解，说明样本不可用； 纯度：OD260/OD280在1.8~2.1之间，比值最好为2.0（保存液为pH=7.0 的RNase free ddH2O）。DNA 应该去除干净； 浓度：最低浓度不低于200ng/μl，每个样品总量不少于10μg； 保存条件：要溶解在H20或TE (pH 8.0)，用冻存管保存，并用干冰或液氮运输;。注：建议在条件允许情况下，提供可供两次样品制备的量，以确保实验质量及延续性。
2.3反转录
miRNA的cDNA第一链合成有两种方法：
加尾法 茎环法2.4 荧光定量检测
SYBR Green I法 Taqman探针法
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可关注我司微信公众号：阿趣代谢，查看相关技术答疑。
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