创建伤口愈合和迁移实验不同方法和差距详解

可以使用不同的方法在细胞单层中创建间隙：

• 插件：通过在细胞接种前将插入物/模板放置在培养表面上来创建物理细胞排除

• 刮擦：通过刮擦表面来机械去除细胞（刮擦测定）

• 阻抗：通过在指定区域施加电压来去除细胞

有关如何创建间隙的更多详细信息和方法，请查看此评论：

W.J. Ashby, A. Zijlstra. Established and novel methods of interrogating two-dimensional cell migration. Integr Biol 2012, 10.1039/c2ib20154b

ibidi 提供三种不同的培养插件用于间隙创建：ibidi培养插件 2 孔、3 孔和4 孔。由于特殊设计的底部，培养插件粘附在表面上，防止任何细胞在壁下生长。取出培养插件后，新产生的无细胞间隙（伤口）是干净的，没有任何残留物。该方法允许在没有任何细胞的情况下可重复地创建高度限定的间隙。

当放置在平坦、干净的表面上时，Culture-Insert 2 Well提供两个用于培养细胞的储液器，两个储液器由 500 μm 厚的壁隔开。将细胞接种到储存器中并培养直至它们附着并形成单层。从表面去除硅胶插件会产生两个精确定义的细胞斑块，它们被与分隔壁宽度完全相同的区域分开。现在可以通过使用活细胞成像或在不同时间点拍照来监测细胞迁移。

Culture -Insert 3 Well提供三个细胞培养槽。它创建两个各 500 µm 的无细胞间隙，因此适合分析两个技术重复或不同细胞类型的迁移。

Culture -Insert 4 Well提供四个细胞培养槽。除了四个 500 µm 无细胞间隙外，它的中间还包括一个 1 mm 的中心间隙。Culture-Insert 4 Well 允许观察最多四个技术重复或不同细胞类型的迁移。

使用 ibidi Culture-Insert 4 Well 进行伤口愈合和迁移测定。

培养插件3 孔| 4孔两者都可以在药物治疗或基因沉默/过度表达（例如，通过 CRISPR/Cas9、siRNA、mRNA）后进行细胞迁移分析。重要的是，未经处理的对照细胞可以在同一容器中接种并分析，共享相同的培养基。

与其他间隙创建技术不同，ibidi 培养插件适用于同时使用两种、三种甚至四种细胞类型或处理的2D侵袭测定和共培养测定。

进行划痕测定时，细胞会生长直至形成单层。然后，用移液管尖端或针手动刮擦细胞表面以产生伤口。通过在不同时间点拍照或活细胞成像来监测伤口闭合和细胞迁移。

关于再现性，该方法有一定的缺点：

• 间隙宽度很大程度上取决于施加到移液器尖端的压力及其尺寸。

• 刮擦会以不可重复的方式去除表面涂层。这改变了该区域的细胞粘附和迁移。

• 去除的细胞以不可重现的方式在划痕边缘形成活细胞和死细胞团。活细胞的扩散可以覆盖迁移的速度。

乍一看，刮擦和放置培养插件的方法似乎是两种非常相似的创建无细胞间隙的方法。然而，仔细观察，这两种方法在可能影响测定结果的重要方面存在差异：

与划痕检测相比，ibidi 培养插片可提供更高的重现性

由于细胞迁移导致开放区域随时间变化。使用 ibidi Culture-Insert 2 Well（左）和使用移液器吸头刮擦（右）创建间隙的比较。数据由德国弗莱堡大学 M. Börries 提供。