人脐静脉内皮细胞HUVEC培养过程中出现的问题及解决方法
人脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVEC）是脐静脉的重要构成细胞之一。当进行血管内皮细胞实验时，通常使用人脐静脉内皮细胞，而非静脉内皮细胞或动脉内皮细胞。永生化的HUVEC会通过慢病毒转染的方式携带RFP基因或GFP基因。
表1 HUVEC细胞基本信息
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名称 |
HUVEC（人脐静脉内皮细胞） |
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形态 |
上皮样 |
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生长特性 |
贴壁 |
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接种密度 |
8.0 x 103-3.0 x 104 viable cells/cm2 |
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传代比率 |
1:2-1:3 |
图1 HUVEC（人脐静脉内皮细胞）
首先要讨论的是HUVEC的“嘴巴刁不刁”？
通常来说，HUVEC的“胃口”还是蛮“刁”的，营养需求很高，除了营养种类丰富的F12和必不可少的胎牛血清（如表2所示），肝素和血管内皮生长因子也是必须的。如图2所示，长势良好的HUVEC呈鹅卵石样，轮廓清晰，铺展均匀，一般2-3天可传代。
表2 为HUVEC精心准备的“食谱”
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营养 |
含量 |
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F12 |
90% |
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胎牛血清 |
10% |
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肝素 |
终浓度0.1mg/ml |
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ECGS血管内皮生长因子 |
0.03-0.05ug/ml |
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双抗 |
1% |
图2 长势良好的HUVEC（人脐静脉内皮细胞）
其次要讨论一下为啥头天换液，第二天HUVEC无限细胞系突然出现空泡化？
如图3所示，严重空空泡化的HUVEC。这里要注意的是有限细胞系的空泡化往往是细胞凋亡的显著特征，与细胞本身状态有关。而无限细胞系空泡化通常与外界因素有管，有以下两种可能： 第一点是培养液的pH值与细胞正常所需pH值差别太大，导致细胞代谢异常，出现空泡化；第二点是在细胞培养过程中，由于血清浓度不够、药物作用、外界刺激等情况下导致细胞代谢出现问题，内质网应激状况下会出现细胞空泡化的情况。
图3 空泡化的HUVEC（人脐静脉内皮细胞）
解决细胞空泡化，通常有两种方法：
1. 测定完培的pH，看其酸碱性是否适宜。多数细胞适宜的pH范围为7.2-7.4。
2. 若培基或血清是开封存放很久的，可换用新鲜的完配给细胞换液；若都是新开封的，可换用新批次的基培或血配制培养液，给细胞换液观察。
最后要讨论的是如何解决HUVEC聚团问题，培养瓶尤其是培养板的亲水性较差时或血清中的促贴壁因子不足时，会导致HUVEC细胞聚团问题。
解决办法：培养瓶前一天用明胶（abs47051214)包被可有效预防HUVEC聚团。包被方法：以 T25 培养瓶为例，取5ml的明胶，加入培养瓶， 放置37℃条件下至少30分钟，然后用枪头将液体吸出即可。如图示4所示，是铺展均匀的HUVEC（人脐静脉内皮细胞）。
图4 正常贴壁，伸展均匀的HUVEC（人脐静脉内皮细胞）
