HPLC－MS/MS法在检测大鼠乳腺微透析液中环磷酰胺浓度的应用

浏览次数：1177　发布日期：2022-8-31　来源：本站　仅供参考，谢绝转载，否则责任自负

环磷酰胺（Cyclophosphamide）是临床上最常用的一种烷化剂类抗肿瘤药，广泛用于治疗恶性淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌等，具有一定的化疗效果。环磷酰胺是一个典型的前体药物，体外无活性，在肝中被细胞色素P450氧化酶氧化，生成活化型的磷酞胺氮芥发挥抗肿瘤作用，属细胞周期非特异性药物。目前，国内环磷酰胺血浆浓度的测定方法主要是GC法和 HPLC法，但耗时较长，检测限偏高。此外，血药浓度结果不能准确反映靶标部位的治疗情况。微透析技术是近年发展起来的一种新型活体靶标取样技术。本研究旨在建立HPLC－MS法测定大鼠乳腺微透析液中环磷酰胺的浓度。

微透析技术可监测靶部位组织细胞外的游离药物浓度，因此，监测组织中药物的浓度比传统血药浓度的定量结果更具预测性。本次实验微透析系统包括CMA150型动物保温垫、CMA402型微量注射泵、MAB85型低温样品收集器、CMA30型线性微透析探针（分子截留值６KU，透析膜长１CM），均购自美国CMA公司。

微透析样品收集及处理

1、探针体外校正　

以林格氏液冲洗探针后，将线性微透析探针浸入装有100ｍｌ林格氏液的微透析反应瓶中，分别以不用浓度的药物（cin,1.0、0.4、0.8μg/ml）作为灌流液，其他条件不变，收集的样品在所建立的HPLC－MS/MS条件下测定透析液中药物浓度。通过减量法计算环磷酰胺的体外探针回收率,Ｒ=（cin－cout）/cin，结果为（53.32±1.23）％。

2、微透析样品收集　

大鼠用水合氯醛按体重（0.4ml/100ｇ,ip）麻醉，腹部朝上固定于保温垫上，使其体温保持在37.5℃。用脱毛膏去除胸部毛，15min后，暴露大鼠乳头，用直尺准确量取探针透析膜进出的长度。将线性微透析探针用18Ｇ穿刺针引导平行植入乳腺组织后，抽回引导针并将探针留于组织中，然后将探针与微透析装置相连。以2μl/ml的流速向其中泵入林格氏液作为灌流液，排除气泡并冲洗管路30min，再以1.0μl/ml的流速向微透析探针中泵入林格氏液，平衡１ｈ后，收集空白透析液。将注射用环磷酰胺用生理盐水溶解，尾静脉注射给药，一次性给予0.20mg/g。以冷冻样品收集器连续收集透析液，采样间隔30min，温度4℃，持续采样2ｈ。

3、样品处理

精密量取透析液样品20μｌ，加入内标溶液10μｌ，涡旋10ｓ，进样2μｌ。