酶解聚获得纯化的细胞株的方法介绍
细胞株分离的方法有多种，常用的是机械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法，下面我们就介绍酶解聚方法获得纯化的细胞株。
1、纯化法
在去除不需要的组织后，使用无菌的解剖刀和剪子把剩余的组织切成3~4 mm小片，通过悬浮在无钙镁的中清洗组织碎片。让组织碎片沉淀，去除上清液。重复清洗2到3次。
将盛有组织碎片的容器置于冰上，去除残留的上清液。加入0.25%溶解在无钙镁的（100 mg组织加入1ml ）。
在4℃孵育6到18小时，使几乎没有活性的酶尽可能渗透进去。
移弃组织碎片中的，在37℃孵育包含残留的组织碎片20到30分钟。
在组织碎片加入热的完全培养基，用移液管轻轻地分散组织。如果使用无血清培养基，要加入大豆抑制剂。
通过无菌不锈钢丝网（100～200 mm）过滤，分散所有剩余组织。计数和接种细胞，进行培养。
2、胶原酶纯化法
用无菌解剖刀和剪子把剩余组织切成3~4 mm小片，用Hanks'平衡液（HBSS）清洗组织碎片几次。
加入胶原酶（50～200单位/ml，溶解在HBSS中）。
在37℃孵育4到18小时。加入3mM CaCl2增加解离效率。
通过无菌不锈钢丝网或尼龙网过滤细胞悬液，以分离分散细胞、组织碎片和较大的碎片。如果需要进一步的解聚，在碎片中加入新鲜的胶原酶。
通过离心在HBSS中清洗悬液几次。
再一次在培养基中悬浮细胞，计数和接种细胞，进行培养。
3、Dispase纯化法
用无菌解剖刀和剪子把剩余组织切成3~4 mm小片，用不含钙镁的清洗组织碎片几次。
加入Dispase（0.6～2.4单位/ml 溶解在无钙镁的）
在37℃孵育20分钟到几个小时。
通过无菌不锈钢丝网或尼龙网过滤细胞悬液，以分离分散细胞、组织碎片和较大的碎片。如果需要进一步的解聚，在碎片中加入新鲜的Dispase。
通过离心在中清洗悬液几次。
再一次在培养基中悬浮细胞，计数和接种细胞，进行培养。
分离细胞后，首ci传代需要注意的问题：
传代培养时先观察细胞的活性。
细胞的活率应该超过90%，密度控制在80%左右
1、纯化法
在去除不需要的组织后，使用无菌的解剖刀和剪子把剩余的组织切成3~4 mm小片，通过悬浮在无钙镁的中清洗组织碎片。让组织碎片沉淀，去除上清液。重复清洗2到3次。
将盛有组织碎片的容器置于冰上，去除残留的上清液。加入0.25%溶解在无钙镁的（100 mg组织加入1ml ）。
在4℃孵育6到18小时，使几乎没有活性的酶尽可能渗透进去。
移弃组织碎片中的，在37℃孵育包含残留的组织碎片20到30分钟。
在组织碎片加入热的完全培养基，用移液管轻轻地分散组织。如果使用无血清培养基，要加入大豆抑制剂。
通过无菌不锈钢丝网（100～200 mm）过滤，分散所有剩余组织。计数和接种细胞，进行培养。
2、胶原酶纯化法
用无菌解剖刀和剪子把剩余组织切成3~4 mm小片，用Hanks'平衡液（HBSS）清洗组织碎片几次。
加入胶原酶（50～200单位/ml，溶解在HBSS中）。
在37℃孵育4到18小时。加入3mM CaCl2增加解离效率。
通过无菌不锈钢丝网或尼龙网过滤细胞悬液，以分离分散细胞、组织碎片和较大的碎片。如果需要进一步的解聚，在碎片中加入新鲜的胶原酶。
通过离心在HBSS中清洗悬液几次。
再一次在培养基中悬浮细胞，计数和接种细胞，进行培养。
3、Dispase纯化法
用无菌解剖刀和剪子把剩余组织切成3~4 mm小片，用不含钙镁的清洗组织碎片几次。
加入Dispase（0.6～2.4单位/ml 溶解在无钙镁的）
在37℃孵育20分钟到几个小时。
通过无菌不锈钢丝网或尼龙网过滤细胞悬液，以分离分散细胞、组织碎片和较大的碎片。如果需要进一步的解聚，在碎片中加入新鲜的Dispase。
通过离心在中清洗悬液几次。
再一次在培养基中悬浮细胞，计数和接种细胞，进行培养。
分离细胞后，首ci传代需要注意的问题：
传代培养时先观察细胞的活性。
细胞的活率应该超过90%，密度控制在80%左右
