SPF级实验动物环境设施常用消毒方法及应用
SPF级实验动物环境设施常用消毒方法及应用
在实际生产运行中，对SPF级实验动物环境的病原微生物的控制要求较高，尤其是对特定病原微生物。SPF级实验动物屏障环境建筑设计较为特殊，整个系统庞大而复杂，功能分区严格，在屏障内长期有活体实验动物和仪器设备，所以在对特定病原微生物控制时的消毒方法应综合考虑。
为了保证屏障工作正常运转，不仅要长期为屏障内的实验动物提供适宜的湿度、温度、照度、控制噪音等，还要长期做好屏障消毒工作，定期对消毒效果进行监测，确保SPF级实验动物屏障内无特定病原微生物感染，否则会影响到整个屏障实验动物质量和动物实验结果。
SPF级实验动物屏障消毒常见方法为机械性清除、物理消毒法和化学消毒法。
机械性清除是用机械的方法清扫、洗刷、通风等清除病原体，是最普通和常用的方法。在SPF级实验动物屏障环境病原微生物控制上，机械性清除是控制病原微生物最基本的要求。但机械性清除法不能彻底对SPF级实验动物屏障环境病原微生物进行清除，但可减少病原微生物在屏障内的数量，属于辅助性消毒。
物理消毒是指利用物理因素杀灭或消除病原微生物及其他有害微生物的方法。SPF级实验动物屏障环境因自身条件要求限制，主要选用脉动真空高压蒸汽灭菌、紫外灯照射杀菌、钴-60辐照3种灭菌物理消毒方法。
化学消毒是指用化学消毒药物作用于微生物和病原体，使其蛋白质变性，失去正常功能而si亡。化学消毒是 SPF 级实验动物屏障最常用的消毒方法，化学消毒使用的化学药品溶液为消毒剂。消毒剂的使用方式包括喷洒、浸泡、擦拭、熏蒸等。目前，SPF 级实验动物屏障常用的有氧化消毒剂、碘类消毒剂、醛类消毒剂、酚类消毒剂、醇类消毒剂、季胺类消毒剂、卤素消毒剂等。
消毒效果比较研究
01不同消毒方式的效果比较
通过对多种消毒方式进行比较研究，选取不同测定时间点 (消毒前及消毒后的30min、2h、6 h、24 h、48 h、72 h)，检查消毒完成前后实验室的沉降菌最大平均浓度，比较各消毒方式最佳效果和持续时间;通过消毒剂在特定条件下对绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌进行杀灭实验， 比较消毒剂的杀菌率以及各种消毒方式的优缺点。
结果如表1、表2所示用甲醛的消毒方式效果最好; 臭氧、过氧乙酸最佳消毒效果持续时间保持在 48 h 内; 消毒泡腾片及 84消毒液最佳消毒效果持续时间保持在 24 h内;新洁尔灭消毒后沉降菌最大平均浓度未符合相关国家标准的规定，且沉降菌最大平均浓度增长速度较快。各消毒剂对两种实验菌株的杀菌率均在99%以上，但新洁尔灭对绿脓杆菌杀菌效果差1。
02不同区域的杀菌消毒剂浓度
对SPF级实验动物饲养器具(饲养盒、饮水瓶)浸泡消毒，有研究结果表明：采用0.1％的碘伏作用30min以上或0.05％的碘伏作用45min以上；2％的强化戊二醛作用5min以上或0.5％的强化戊二醛作用30min以上；华威一号有效含量达200mg/L作用20min以上，100mg/L或50mg/L作用45min以上；0.4％的过氧乙酸作用10min以上，0.2％的过氧乙酸作用20min以上或0.1％的过氧乙酸作用45min以上，可以达到99.9％杀菌率。
对SPF级实验动物设施屏障系统内墙面、笼面及空气进行喷雾消毒处理研究发现：浓度为2％的强化戊二醛、有效含量为250mg/L的华威一号、2％的过氧乙酸效果比较好。
对SPF级实验动物设施屏障系统内墙面、笼面进行擦拭消毒，0.5％、1％、1.5％、2％的戊二醛都能维持99.9％杀菌率2天；采用125mg/L、250mg/L、500mg/L的华威一号对SPF级实验动物设施屏障系统内墙面、笼面进行擦拭消毒，可以维持墙面和笼具99.9％以上的杀菌率1天，50mg/L的华威一号只能维持墙面99.9％以上的杀菌率1天。
采用0.25％和0.5％的碘伏对SPF级实验动物设施屏障系统内墙面、笼面进行擦拭消毒，均可以维持99.9％的杀菌率达5天，0.1％的碘伏可以维持99.9％的杀菌率3天，0.05％的碘伏可以维持99.9％以上的杀菌率2天。
采用过氧乙酸对SPF级实验动物设施屏障系统内墙面、笼面进行擦拭消毒，在第2，3，5天的杀菌效果都很好，0.125％的过氧乙酸即可维持99.99％的杀菌率5天。
上述结果说明四种消毒剂都适用于对SPF级实验动物饲养器具(饲养盒、饮水瓶)浸泡消毒，最适用0.1％的碘伏、2％的强化戊二醛、200mg/L的华威一号、0.4％的过氧乙酸。由于强化戊二醛对不锈钢无腐蚀性，所以强化戊二醛最适用于对SPF级实验动物不锈钢笼具的浸泡消毒，对于饲养盒、饮水瓶等非金属物品的浸泡消毒，则四种消毒剂都适用2。
采用空气落下菌检测法和表面细菌拭子检测法，对过氧化氢和甲醛熏蒸SPF级大鼠和小鼠繁殖室的消毒效果进行检测观察。过氧化氢和甲醛对大鼠繁殖室和小鼠繁殖室空气的杀菌率分别为100%、97.5%和100%、100%;将墙壁、地面和笼架表面的菌落数进行检测，过氧化氢和甲醛对大鼠繁殖室墙壁、地面和笼架的杀菌率分别为100%、99%、100%和95%、100%、99%，对小鼠繁殖室墙壁、地面和笼架的杀菌率均为100%。过氧化氢蒸汽消毒是比较理想的消毒方法，很好地控制了SPF级大鼠和小鼠繁殖室环境微生物，安全性高且消毒效果明显3。
过氧乙酸在较低浓度、较短时间内即可达到良好消毒效果，可用于擦拭、浸泡和喷雾消毒。
03其他相关研究
有研究报道，0.3%~0.5%过氧乙酸5 min内即 可对大多数测试菌如沙门氏菌、布鲁氏菌、假单胞菌、金黄色葡萄球菌等起到良好杀灭效果，0.25%过氧乙酸1 min内即可对白色念珠菌达到良好杀灭效果。
余思义4使用过氧乙酸消毒液对实验动物饲养器具进行浸泡消毒，结果显示，0.4%过氧乙酸作用10 min、0.2%过氧乙酸作用20 min，均可达到99.9%的杀菌率；使用0.125%过氧乙酸对屏障设施墙面、笼架进行擦拭消毒，可维持99.9%的杀菌率5 d，且浓度越高，杀菌效果越好。刘建高等5使用0.2%过氧乙酸按8 mL/m3的用量对现场空气喷雾消毒作用30 min，杀菌率可达95.52%~99.36%。
尹进等6报道了二元包装的过氧乙酸消毒液的杀菌效果，结果显示 0.1%的该消毒液按照 10 mL/m3的用量对现场喷雾消毒，作用30 min，其对空气自然菌杀菌率 90%以上；悬液定量杀菌结果显示 0.01%的该消毒液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌作用5 min，杀菌对数值均大于5; 使用0.1%的该消毒液对枯草芽孢杆菌作用30 min，杀菌对数大于5。
郑吟秋等7芽孢悬液浸泡试验结果显示，0.2%过氧乙酸对枯草杆菌黑色变种芽孢作用10min，可完全将其杀灭。综上，在实验动物屏障设施中，建议 0.1% ~0.5%过氧乙酸用于耐腐蚀的物品、设施设备表面喷雾、擦拭或浸泡消毒；0.2%~0.5%过氧乙酸按8~12 mL/m3的用量用于屏障设施的空气喷雾消毒，每周3~5 次。
04消毒方法及存在的问题
SPF 级别的动物房由于其特殊的结构和组成，对环境空间消毒的要求是相对较高的，传统的臭氧，紫外线其消毒级别比较低，不能满足高水平消毒的需求，甲醛、过氧乙酸存在毒性和腐蚀性问题。目前， 过氧化氢消毒方式，其安全性，环保型，及消毒效果解决了其他消毒方式遗留的问题。
过氧化氢消毒液产品能够具备：
高效杀菌
没有有害残留
作用持久
对人体无害，无毒
对环境无害且无二次污染
无腐蚀性
无耐药性
使用简单，且不会带来异味，没有刺激性
诺福过氧化氢消毒液，消毒杀菌技术具备上述的优点，使得它可以 成为一种既能用于手部消毒，又能用于器械杀菌，既能完成空间环境消毒又能解决管道生物膜的多功能复合型消毒产品。能够杀灭200多种有害微生物，同时拥有大量国内外权威机构的检测认证报告。能够对黑枯草芽孢达到10的6次方的杀灭效果，可以将悬浮在空间中的10的6次方生物指示剂的嗜热脂肪杆菌芽孢有效的杀灭；能够杀灭包括革兰氏菌、真菌、霉菌、支原体、病毒、超级细菌等在内的200多种微生，包括鲍曼不动杆菌、MRSA 、MREA、艰难梭菌等常见的耐药菌种。
总结
SPF级实验动物屏障实际生产的消毒方法应用中，理想的消毒方法应要求对安全、高效、稳定、低价位等特点进行综合考虑。例如物理消毒应该考虑被消毒物品的物理性能；在化学消毒法中选择消毒剂时，因消毒剂品种不同，对病原微生物作用也不同，应根据具体情况进行综合比较后做出适当的选择；同时还要考虑到化学消毒剂的理化因素，如温度、湿度、酸碱度、有机物、化学拮抗或中和作用，消毒剂的浓度变化等都会影响消毒效果，在消毒剂使用时也应考虑外部因素对其消毒效果的影响。在屏障实际生产运行过程中，往往采用多种消毒方法才能达到彻底消毒的效果。
在实际生产运行中，对SPF级实验动物环境的病原微生物的控制要求较高，尤其是对特定病原微生物。SPF级实验动物屏障环境建筑设计较为特殊，整个系统庞大而复杂，功能分区严格，在屏障内长期有活体实验动物和仪器设备，所以在对特定病原微生物控制时的消毒方法应综合考虑。
为了保证屏障工作正常运转，不仅要长期为屏障内的实验动物提供适宜的湿度、温度、照度、控制噪音等，还要长期做好屏障消毒工作，定期对消毒效果进行监测，确保SPF级实验动物屏障内无特定病原微生物感染，否则会影响到整个屏障实验动物质量和动物实验结果。
SPF级实验动物屏障消毒常见方法为机械性清除、物理消毒法和化学消毒法。
机械性清除是用机械的方法清扫、洗刷、通风等清除病原体，是最普通和常用的方法。在SPF级实验动物屏障环境病原微生物控制上，机械性清除是控制病原微生物最基本的要求。但机械性清除法不能彻底对SPF级实验动物屏障环境病原微生物进行清除，但可减少病原微生物在屏障内的数量，属于辅助性消毒。
物理消毒是指利用物理因素杀灭或消除病原微生物及其他有害微生物的方法。SPF级实验动物屏障环境因自身条件要求限制，主要选用脉动真空高压蒸汽灭菌、紫外灯照射杀菌、钴-60辐照3种灭菌物理消毒方法。
化学消毒是指用化学消毒药物作用于微生物和病原体，使其蛋白质变性，失去正常功能而si亡。化学消毒是 SPF 级实验动物屏障最常用的消毒方法，化学消毒使用的化学药品溶液为消毒剂。消毒剂的使用方式包括喷洒、浸泡、擦拭、熏蒸等。目前，SPF 级实验动物屏障常用的有氧化消毒剂、碘类消毒剂、醛类消毒剂、酚类消毒剂、醇类消毒剂、季胺类消毒剂、卤素消毒剂等。
消毒效果比较研究
01不同消毒方式的效果比较
通过对多种消毒方式进行比较研究，选取不同测定时间点 (消毒前及消毒后的30min、2h、6 h、24 h、48 h、72 h)，检查消毒完成前后实验室的沉降菌最大平均浓度，比较各消毒方式最佳效果和持续时间;通过消毒剂在特定条件下对绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌进行杀灭实验， 比较消毒剂的杀菌率以及各种消毒方式的优缺点。
结果如表1、表2所示用甲醛的消毒方式效果最好; 臭氧、过氧乙酸最佳消毒效果持续时间保持在 48 h 内; 消毒泡腾片及 84消毒液最佳消毒效果持续时间保持在 24 h内;新洁尔灭消毒后沉降菌最大平均浓度未符合相关国家标准的规定，且沉降菌最大平均浓度增长速度较快。各消毒剂对两种实验菌株的杀菌率均在99%以上，但新洁尔灭对绿脓杆菌杀菌效果差1。
02不同区域的杀菌消毒剂浓度
对SPF级实验动物饲养器具(饲养盒、饮水瓶)浸泡消毒，有研究结果表明：采用0.1％的碘伏作用30min以上或0.05％的碘伏作用45min以上；2％的强化戊二醛作用5min以上或0.5％的强化戊二醛作用30min以上；华威一号有效含量达200mg/L作用20min以上，100mg/L或50mg/L作用45min以上；0.4％的过氧乙酸作用10min以上，0.2％的过氧乙酸作用20min以上或0.1％的过氧乙酸作用45min以上，可以达到99.9％杀菌率。
对SPF级实验动物设施屏障系统内墙面、笼面及空气进行喷雾消毒处理研究发现：浓度为2％的强化戊二醛、有效含量为250mg/L的华威一号、2％的过氧乙酸效果比较好。
对SPF级实验动物设施屏障系统内墙面、笼面进行擦拭消毒，0.5％、1％、1.5％、2％的戊二醛都能维持99.9％杀菌率2天；采用125mg/L、250mg/L、500mg/L的华威一号对SPF级实验动物设施屏障系统内墙面、笼面进行擦拭消毒，可以维持墙面和笼具99.9％以上的杀菌率1天，50mg/L的华威一号只能维持墙面99.9％以上的杀菌率1天。
采用0.25％和0.5％的碘伏对SPF级实验动物设施屏障系统内墙面、笼面进行擦拭消毒，均可以维持99.9％的杀菌率达5天，0.1％的碘伏可以维持99.9％的杀菌率3天，0.05％的碘伏可以维持99.9％以上的杀菌率2天。
采用过氧乙酸对SPF级实验动物设施屏障系统内墙面、笼面进行擦拭消毒，在第2，3，5天的杀菌效果都很好，0.125％的过氧乙酸即可维持99.99％的杀菌率5天。
上述结果说明四种消毒剂都适用于对SPF级实验动物饲养器具(饲养盒、饮水瓶)浸泡消毒，最适用0.1％的碘伏、2％的强化戊二醛、200mg/L的华威一号、0.4％的过氧乙酸。由于强化戊二醛对不锈钢无腐蚀性，所以强化戊二醛最适用于对SPF级实验动物不锈钢笼具的浸泡消毒，对于饲养盒、饮水瓶等非金属物品的浸泡消毒，则四种消毒剂都适用2。
采用空气落下菌检测法和表面细菌拭子检测法，对过氧化氢和甲醛熏蒸SPF级大鼠和小鼠繁殖室的消毒效果进行检测观察。过氧化氢和甲醛对大鼠繁殖室和小鼠繁殖室空气的杀菌率分别为100%、97.5%和100%、100%;将墙壁、地面和笼架表面的菌落数进行检测，过氧化氢和甲醛对大鼠繁殖室墙壁、地面和笼架的杀菌率分别为100%、99%、100%和95%、100%、99%，对小鼠繁殖室墙壁、地面和笼架的杀菌率均为100%。过氧化氢蒸汽消毒是比较理想的消毒方法，很好地控制了SPF级大鼠和小鼠繁殖室环境微生物，安全性高且消毒效果明显3。
过氧乙酸在较低浓度、较短时间内即可达到良好消毒效果，可用于擦拭、浸泡和喷雾消毒。
03其他相关研究
有研究报道，0.3%~0.5%过氧乙酸5 min内即 可对大多数测试菌如沙门氏菌、布鲁氏菌、假单胞菌、金黄色葡萄球菌等起到良好杀灭效果，0.25%过氧乙酸1 min内即可对白色念珠菌达到良好杀灭效果。
余思义4使用过氧乙酸消毒液对实验动物饲养器具进行浸泡消毒，结果显示，0.4%过氧乙酸作用10 min、0.2%过氧乙酸作用20 min，均可达到99.9%的杀菌率；使用0.125%过氧乙酸对屏障设施墙面、笼架进行擦拭消毒，可维持99.9%的杀菌率5 d，且浓度越高，杀菌效果越好。刘建高等5使用0.2%过氧乙酸按8 mL/m3的用量对现场空气喷雾消毒作用30 min，杀菌率可达95.52%~99.36%。
尹进等6报道了二元包装的过氧乙酸消毒液的杀菌效果，结果显示 0.1%的该消毒液按照 10 mL/m3的用量对现场喷雾消毒，作用30 min，其对空气自然菌杀菌率 90%以上；悬液定量杀菌结果显示 0.01%的该消毒液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌作用5 min，杀菌对数值均大于5; 使用0.1%的该消毒液对枯草芽孢杆菌作用30 min，杀菌对数大于5。
郑吟秋等7芽孢悬液浸泡试验结果显示，0.2%过氧乙酸对枯草杆菌黑色变种芽孢作用10min，可完全将其杀灭。综上，在实验动物屏障设施中，建议 0.1% ~0.5%过氧乙酸用于耐腐蚀的物品、设施设备表面喷雾、擦拭或浸泡消毒；0.2%~0.5%过氧乙酸按8~12 mL/m3的用量用于屏障设施的空气喷雾消毒，每周3~5 次。
04消毒方法及存在的问题
SPF 级别的动物房由于其特殊的结构和组成，对环境空间消毒的要求是相对较高的，传统的臭氧，紫外线其消毒级别比较低，不能满足高水平消毒的需求，甲醛、过氧乙酸存在毒性和腐蚀性问题。目前， 过氧化氢消毒方式，其安全性，环保型，及消毒效果解决了其他消毒方式遗留的问题。
过氧化氢消毒液产品能够具备：
高效杀菌
没有有害残留
作用持久
对人体无害，无毒
对环境无害且无二次污染
无腐蚀性
无耐药性
使用简单，且不会带来异味，没有刺激性
诺福过氧化氢消毒液，消毒杀菌技术具备上述的优点，使得它可以 成为一种既能用于手部消毒，又能用于器械杀菌，既能完成空间环境消毒又能解决管道生物膜的多功能复合型消毒产品。能够杀灭200多种有害微生物，同时拥有大量国内外权威机构的检测认证报告。能够对黑枯草芽孢达到10的6次方的杀灭效果，可以将悬浮在空间中的10的6次方生物指示剂的嗜热脂肪杆菌芽孢有效的杀灭；能够杀灭包括革兰氏菌、真菌、霉菌、支原体、病毒、超级细菌等在内的200多种微生，包括鲍曼不动杆菌、MRSA 、MREA、艰难梭菌等常见的耐药菌种。
总结
SPF级实验动物屏障实际生产的消毒方法应用中，理想的消毒方法应要求对安全、高效、稳定、低价位等特点进行综合考虑。例如物理消毒应该考虑被消毒物品的物理性能；在化学消毒法中选择消毒剂时，因消毒剂品种不同，对病原微生物作用也不同，应根据具体情况进行综合比较后做出适当的选择；同时还要考虑到化学消毒剂的理化因素，如温度、湿度、酸碱度、有机物、化学拮抗或中和作用，消毒剂的浓度变化等都会影响消毒效果，在消毒剂使用时也应考虑外部因素对其消毒效果的影响。在屏障实际生产运行过程中，往往采用多种消毒方法才能达到彻底消毒的效果。
