DNA片段中的分子计数法及其应用实例

实验室数学在生物学实验数据分析中一直是一个令人头疼的问题？在定量PCR实验中，常常会遇到计算 DNA 片段中的分子、计算溶液的浓度或计算连续稀释等，这样的计算有没有什么好的方法呢？
当然有了，在本文中，我们将教你简单的 DNA 样本中的分子计数法。

——例如，套入公式即可一招轻松拆解：500 ng 样本中有多少个 50 碱基对 (bp) 片段的模板 /副本？这样的棘手问题。使您很快就会成为实验室中的计算高手！

一、计算 DNA片段中分子数量的应用
在进行以下类型的实验时，通常需要DNA分子的计算：
DNA 连接。
生化分析。
实时 PCR（绝对定量）。
测量载体基因组的数量。

二、分子数计算公式的原理
我们知道，单个 DNA bp 的平均重量为 650 道尔顿。这也可以写为 650 g/mol（= 摩尔质量）。因此，任何双链 DNA 片段的分子量或摩尔质量都可以通过将其长度（以 bp 为单位）乘以 650来计算，答案将表示为道尔顿或 g/mol。
只要我们知道序列长度（即基因组的长度/大小），此计算将适用于任何物种的基因组 DNA。

三、实例与应用：
1.实例问题： 5.2-kb 质粒的分子量是多少？记住 5.2 kb = 5200 bp
计算： 5200 bp x 650 道尔顿 = 3,380,000 道尔顿或 g/mol
现在我们知道如何计算 DNA 模板的分子量了。使用阿伏伽德罗数，即 6.022 x 10 ²³分子/摩尔，可以使用以下公式计算每份模板的分子数：

2.实例问题：您有 300 ng 的 5.2-kb 质粒。你的质粒有多少 拷贝？
 
 
3.实例问题：您有 50 ng 的 20-bp 引物。你的引物有多少份？

4.实例问题：您有 150 ng 的 670 bp 纯化 PCR 产物，你有多少份 PCR 产物？
 
注意：此公式基于您使用的是单一 DNA 物种的假设，因此在应用于 PCR 产物或质粒时，请确保您只有 1 个条带或您有干净的质粒小量制备。
所以实验中，只要知道 DNA 片段的长度和以纳克为单位的浓度，您就可以轻松应用该公式来获得任何类型的 DNA 样本中的拷贝数。

四、其他分子量计算常用的公式


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