细胞形态异常，鱼骨图来帮忙（一）

各位做实验的时候都遇到过这种情况吗？
当您开开心心地把养好的细胞拿出来
准备做后续实验时
突然发现
“啊~~~，我的细胞又长跑偏了！！！”
谁能体会实验猿的这种心塞

那么这个时候我们就发挥出了作为一个实验猿的耐心和决心
一定要搞清楚，到底是哪一步出现了问题
导致细胞形态异常
BI中国市场部为大家贴心的准备了一份礼物~
鱼骨图
（进入官网点击相应骨刺即可查看相关讯息噢~）
接下来，大家跟紧小编的步伐，一起去探索鱼骨图的奥秘吧 ！

鱼骨图是一种分析问题产生的质量管理方法，此鱼骨图分析造成细胞形态发生异常时的几个主要原因：
◆ 外源污染（微生物污染）
◆ 内源异常（细胞层面）
◆ 人为操作/环境
◆ 培养基
◆ 辅助试剂
◆ 培养耗材
鱼骨图可帮助研究人员厘清实验上的问题。鱼骨图鱼刺的大到小或近到远,相应表示问题发生概率的高低。
接下来，我们将逐条分析这些污染原因，并为大家附上解决方案。（如下表格点击货号即可查看产品信息）

外源污染

外源污染主要指的是微生物污染，又可分为以下几点：

  ✫ 真菌，酵母菌  ✫ 细菌  ✫支原体 ✫ 黑胶虫 ✫ 病毒 ✫ 细胞交叉污染
以下几种微生物污染，通常是肉眼可见突发式造成细胞培养基浑浊和变色，在可见光显微镜下可以观察到真菌、酵母菌和细菌污染状况。


01  真菌，酵母菌

---

 真菌：这类微生物外观类似棉絮状的漂浮物，在显微镜下可观察到菌丝体，污染早期不会使培养基变黄。
酵母菌：显微镜下常见成串的珠状物形态呈卵形，大约比细胞小5~10倍，当其进行出芽生殖时，会聚集成连体结构；爆发污染严重时，会造成培养基pH值改变，不易除去。

解决方案：

表1.产品列表

产品名称-中文名称 货号 作用种类作用种类 两性霉素B，250mg/ml 03-028-1 真菌，酵母菌和霉菌 两性霉素B，2500mg/ml 03-029-1 制真霉素，10000units/ml 03-030-1 真菌，酵母菌和霉菌 青链双抗（青霉素-链霉素） 03-031-1 对革兰氏阳性菌G+，革兰氏阴毒性G- 青链双抗（青霉素-链霉素）10X浓缩 03-031-5 青链霉素，制真菌素三抗 03-032-1 真菌、酵母菌和霉菌、G+、G- 青链霉素，两性霉素B三抗 03-033-1 真菌、酵母菌和霉菌、G+、G- 青链霉素，新霉素三抗 03-034-1 真菌、酵母菌和霉菌、G+、G- 硫酸庆大霉素溶液，50mg/ml 03-035-1 对革兰氏阳性菌，革兰氏阴性菌，支原体 卡那霉素溶液，10mg/ml 03-049-1 对革兰氏阳性菌，革兰氏阴性菌，支原体

产品名称-

02  细菌

---

细菌污染时，培养基在短时间内变成黄色或白色浑浊，细胞停止生长甚至死亡；有些状况下培养基颜色改变不明显但细胞形态会变异（出现多角，多核状况）、细胞不附着，显微镜观察背景有大量黑点。
解决方案：（同上表格1）
Dr.Cell可提供：微生物测序检测

03  支原体

---

支原体种类较多，常以寄生或腐生营养方式生长，广泛存在于环境之中，是细胞培养过程常见污染，经常来源于实验人员（支原体常见于人体皮肤、呼吸道、生殖道和消化道）、动物源血清及胰酶、消毒不完全的器具，大小只有0.15~0.3μm，所以能通过一般标准的细胞培养过滤方法，0.22μm过滤膜。支原体增长速度相较于细菌比较缓慢，污染初期（轻微）培养基可能依然清澈不会变黄，所以轻微污染时不容易用常规方法发现（细胞外观观察或是DNA染色法）确认。
支原体污染不但会缓慢改变细胞形态、增殖、基因表达、蛋白合成及代谢反应，它携带的DNA/RNA与蛋白更可能造成QPCR、Western Blot或外泌体实验结果偏差。
解决方案：

Biological Industies（BI）可提供：支原体检测/处理/预防全套解决方案

表2.支原体相关产品列表

中文名称 货号 备注 支原体污染检测试剂盒 20-700-20 高敏感性PCR反应检测方式，明确及快捷 的确认细胞培养中支原体污染 支原体污染处理试剂 03-036-1 03-036和03-037需要联合使用 03-038单独使用，这是两种不同的处 理支原体污染的途径，效果也会有所不同 03-037-1 03-038-1 支原体、细菌、真菌污染预防喷雾剂 IC-110100 培养箱和无菌操作台消毒试剂，可有效预防 微生物的生长和污染。其成分是可生物降解， 无毒无刺激 支原体预防试剂 01-867-1 即用型的浓缩溶液，50ml Aquaguard-1溶液 加至5L的无菌水中，每2-4周更换一次培养箱中水 01-916-1 添加在水浴锅中，高效抗菌性化学化合物， 可有效杀灭革兰氏阳性菌和阴性菌

Dr.Cell可提供：支原体污染检测

04  黑胶虫

---

目前科学界对黑胶虫并无定论，认为是不明沉淀现象或多种未知生物污染现象的通称。
在高倍率显微镜头下，可观察到各式形状的小黑点（卵圆状、球状、杆状等）、活跃的布朗运动及明显游动现象，部分黑胶虫具有细胞毒性，可引起细胞生长迟缓或裂解凋亡。
解决方案：
Dr.Cell可提供：黑胶虫样本鉴定
目前检测的黑胶虫样本，实际上62%为细菌，38%为支原体（如下图1）

图1
 

05  病毒

---

病毒感染可能来自宿主动物细胞或病人，病毒感染及传播具有细胞专一性，在细胞培养污染物中是相对最难检测的。然而一旦细胞遭受污染后显微镜下能明显观察到细胞碎片增多、肿大、圆缩、脱落等病态变形，严重时会在单层细胞上观察到局部破损空斑。
解决方案：
可选用辐照血清以避免带进任何活的微生物进入培养体系。

     
           图2.Before infection        图3.After 24 hours infectiond
 

06  细胞交叉污染

---

细胞株的交叉污染，曾有文献报道统计，目前使用的细胞株大约有15~20%不是科学家们所认为的细胞，而在生物医药领域中，细胞来源和细胞株身份鉴定检测观念普遍缺乏。细胞株的交叉污染，常在不经意的实验疏失疏忽（不同细胞株分盘时，共享一瓶培养基、枪头、移液管忘记更换，而造成不同细胞株之间的混合污染，或是实验操作人员录入错误细胞株名称，继代时的培养皿，冷冻细胞时的冻存管）中发生，而造成错误后续数据搜集；目前大部分的科学期刊都已有“细胞相关实验论文发表前，均需附上细胞鉴定报告”的规定（可查阅：文章发表前要求提供细胞鉴定的杂志），以此保证数据来源的正确性。

目前常用的细胞身份验证的方式包括：短串联重复序列（STR）、同功酶分析、染色体组分型、扩增片段长度多态性（AFLP）的特征分析等方法。其中STR，是目前国际细胞库（包括：ATCC、DSMZ或是JCRB）常用于细胞株身份鉴定方法。 
小编温馨提示，至少每半年一次进行细胞鉴定，当然理想情况每2-3个月鉴定一次，且课题开展前最好先确认使用的细胞身份。
解决方案：
Dr.Cell可提供：
1. 人源细胞系STR鉴定（STR Authentication）
2. 细胞物种鉴定（Species Identification）-15种常见模式动物的鉴定
 

THE END
您在实验中有过这些问题嘛？
最后是怎么解决的呢，欢迎大家留言吐槽噢~

好啦，本期介绍就到这里啦，后续小编会根据顺序
继续为大家分享噢~

原文链接