细胞有丝分裂的实验操作步骤

 细胞有丝割裂指数(mitotic index，MI)是指归于割裂期的细胞占总细胞数的百分率．用于表明细胞增殖旺盛的程度，也可用于检查药物对细胞增殖能力的影响。用盖玻片培育法培育细胞，做固定和染色后，镜下调查和计数1000个细胞中处于割裂期的细胞数并核算MI。
 
(一)材料
 
1．待检资料(药物)。
 
2．细胞培育成层的贴壁细胞。
 
3．试剂 甲醇、3％吉姆萨染液。
 
4．器材CO2培育箱、倒置显微镜、盖玻片(2．2 cm×2．2 cm，需预先清洁和灭菌处理)、塑料培育皿(3．5 cm)、载玻片、封片用盖玻片、中性树胶。
 
(二)试验办法
 
1．将细胞消化成单个细胞悬液，将细胞悬液分瓶培育，分红不加药的对照组和加人不一样剂量药物的试验组。
 
2．细胞传代培育的办法培育细胞，并制成浓度为105／ml的细胞悬液。
 
3．将清洁和灭菌处理的盖玻片放置在塑料培育皿中，将细胞悬液摇匀后接种于培育皿中，各皿中接种量一样。
 
4．别离于培育24 h、48ht和72h后从培育皿中取出盖玻片，在Hanks液中漂洗2～3次。
 
5．先用甲醇固定30 min，再用吉姆萨染液染色。晒干后用中性树胶封片。
 
6．油镜下或高倍镜下计数1000个细胞中处于割裂期的细胞数。
 
7．核算MI按下列公式核算MI。
 
(三)成果与分析
 
    将对照组和药物组的试验成果绘制成直方图并加以比较，也可绘制成MI曲线进行比较：
 
(四)注意事项
 
1．为了削减误差，试验者有必要了解各期割裂象细胞的形状特征，该试验从头到尾最好由一人完结，当两人以上调查时，应把握一样的标准。
 
2．MI曲线与细胞生长曲线趋势根本相似，但不彻底一样。如果在细胞增长达饱和密壁并进入中止期后．细胞数量许多，而割裂象细胞可彻底消失。
 
3．细胞在盖玻片上的密度常不均匀，细胞密集区与稀疏区的割裂象细胞数目也许不一样。计数时要挑选密度近似区，以削减试验误差。