细胞培养的注意事项
养好细胞注意点
（一）冷冻管应如何解冻
取出冷冻管后，须立即放入37 ℃ 水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管的爆裂。
（二）细胞冷冻管解冻培养时，DMSO如何处理
在细胞解冻之后，可直接离心去除DMSO，用新鲜的培养基悬浮后直接放入含有 新鲜培养基的培养角瓶中进行细胞培养，如此可避免解冻后细胞生长受到DMSO影响。
（三）可否使用与原先培养条件不同的培养基
每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基，若骤然使用和原先提供培养条件不同的培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活，不应该马上替换。
（四）可否使用与原先培养条件不同的血清种类
血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
（五）何谓 FBS，FCS，CS，HS
FBS （fetal bovine serum） 和 FCS （fetal calf serum） 是相同的意思，两者都是指胎牛血清。CS （calf serum） 则是指小牛血清。HS （horseserum） 则是指马血清。
（六）培养细胞时应使用 5% 或 10% CO2
一般培养基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作为 pH 的缓冲系统，而培养基中 NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的 CO2 浓度。理论当培养基中 NaHCO3 含量为每公升 3.7 g 时，细胞培养时应使用 10% CO2；当培养基中 NaHCO3 为每公升 1.5 g 时，则应使用 5% CO2 培养细胞。
（七）何时须更换培养基。培养基中是否须添加抗生素。
视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上的更换时间，按时更换培养基即可。
一般正常培养状态下，培养基中可以添加抗生素。 按1％体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素)，使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U／mL和100 μ／mL。
(八）贴壁细胞传代时所使用的 trypsin-EDTA 浓度及相应处理
一般使用的 trypsin-EDTA 浓度为 0.25% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于 –20 ℃，避免反复冷冻解冻造成 trypsin 的活性降低，并可减少污染的机会.。
（九）将一般动物细胞离心下来，离心速率多少
回收动物细胞，其离心速率一般为 1 000 rpm，5~10 分钟，过高的转速，将造成细胞死亡。
（十）细胞的接种密度
依照细胞株基本数据上的接种密度或稀释分盘的比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长的重要原因之一。
（十一）细胞冷冻培养基的成分及DMSO的等级
动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含 5~10% DMSO （dimethyl sulfoxide） 和 90~95 % 原来细胞生长用的新鲜培养基均匀混合。注意：由于 DMSO 稀释时会放出大量热能，故不可将 DMSO 直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成。冷冻保存使用的 DMSO 等级，必须为 Tissue culture grade 的 DMSO ，其本身即为无菌状况，第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中避光保存。
（十二）冷冻保存细胞的方法及冷冻细胞浓度
将贴壁细胞消化后离心收集，悬浮细胞直接离心收集，以含有DMSO完全培养基或胎牛血清的冻存液重悬细胞至终浓度约1x106/ml。。以每管1～2ml分装至冻存管中。用绝热材料包裹置-70摄氏度冰箱冷冻过夜。次日保存到液氮中。
冷冻管内细胞数目一般为 1x106 cells/ml vial，融合瘤细胞则以 5x106 cells/ml vial 为宜。
