盐酸美金刚片中N-（二甲基金刚烷）甘氨酸（DMAG）的测定
应用ACQUITY UPLC /Xevo G2-S QTof系统测定盐酸美金刚片中
N-(二甲基金刚烷)甘氨酸(DMAG)的含量
王志英
沃特世科技(上海)有限公司
前言：
盐酸美金刚(Memantine hydrochloride)为抗老年痴呆药物，是第一个对老年痴呆症有显著疗效的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)拮抗药，它可以改善记忆过程所需谷氨酸的传递，并具有较好的耐受性。它是美国联邦食品和药品管理局(FDA)批准治疗中度与重度老年痴呆症的第一种药物。
N-(二甲基金刚烷)甘氨酸(DMAG)是盐酸美金刚片中已知的杂质之一，在国家局发布的进口药品注册标准(JX20120025)中规定其含量不得到过0.5%。DMAG本身无紫外吸收，进口药品注册标准中采用加内标的质谱方法检测，检测时间需30 min，本应用纪要直接采用外标法进行N-(二甲基金刚烷)甘氨酸的检测。
Xevo G2-S QTof可得到最准确的分子量，具有卓越的定性性能，同时它也有优良的定量能力。本方案应用Xevo G2-S QTof的定量能力来检测盐酸美金刚片中N-(二甲基金刚烷)甘氨酸的含量。利于Xevo G2-S QTof的定量方式为：对样品进行全扫描(full scan)，再从得到的数据中提取关注的分子量进行处理计算。这种定量检测方式有几个好处，一是全扫描的数据可得到样品最全面的信息，让我们对样品更了解；二是更有利于开发方法，很方便就看出是否有共流出干扰，保证方法的稳定性和可靠性；三是一次可以对无数个化合物进行定量检测；四是若事后出现事故调查时，可从已有数据中得到更多信息。
实验条件：
样品制备：取盐酸美金刚片1 片，精密加甲醇-水(50：50)1mL，涡漩2次，每次5秒，两次间隔1 min，确保样品完全崩解后，经0.22 μm 微孔滤膜滤过，精密量取续滤液10 μL，置1.5 mL进样瓶中，精密加入甲醇-水(50:50)990 μL，混匀，即得。对照溶液的配制：分别配置包含相同浓度的盐酸美金刚和N-(二甲基金刚烷)甘氨酸对照品混合溶液，稀释剂为甲醇-水(50:50)，1到10号对照品溶液浓度，如表1。
结果与讨论：
进口药品注册标准中采集的方法时间较长，为30 min一针，改用1.7 μm的BEH C18 100 x 2.1 mm色谱柱，应用HPLC到UPLC的方法转换器将方法进行同步转换，采集时间可缩短至5 min。并且将流动相中的三氟乙酸改为甲酸
的溶液。DMAG和盐酸美金刚分离度良好，如图1。
灵敏度测试：对照品10号溶液，即DMAG的含量为1 ng/mL，进3 μL时，S/N(PtP)=41.7；当进样量改为1 μL
时，S/N(PtP)=10.9，此时柱上样量为1 pg，此浓度可作为定量限，如图2。
图2. DMAG的提取离子流图：对照品10号溶液进3 μL、
对照品10号溶液进1 μL
重现性：进9号对照品溶液，即DMAG浓度为10 ng/mL，重复进样三次，%RSD=0.47。TargetLynx可自动进行质
量数提取、峰面积积分并计算，如图3。
图3. TargetLynx软件对9号对照品溶液连续进三针
所得DMAG自动计算%RSD
线性：采用进口注册标准中y=ax2+bx+c方式做回归曲线。所得结果如图4。应用软件自动计算线性，得到的线性方程为y=-0.000919094X2 +15.9004X-1.93231；r=0.9994；TargetLynx界面简洁，可从结果列表中快速读取线性方程信息及供试品中DMAG的含量。供试品盐酸美金刚中含有6.1 ng/mL的N-(二甲基金刚烷)甘氨酸。
图4. TargetLynx软件自动线性回归，自动计算出样品中含量
结论：
本实验将常规HPLC色谱柱检测方法平行转化为亚2 μm的UPLC色谱柱检测，分析时间由30 min缩短至
5 min，大大提高分析效率。Xevo G2-S QTof一方面可得到最准确的分子量用于化合物的定性，同时在定
量方面也表现突出。具有较高的灵敏度，N-(二甲基金刚烷)甘氨酸柱上样量1 pg可被定量检测；具有
良好的重现性，三针重现性%RSD=0.47%(10 ng/mL)；较宽的线性范围，浓度在1~5000 ng/mL浓度范围
内，线性方程系数R=0.9994。 软件MassLynx/TargetLynx应用简便，自动进行线性回归并计算样品中含
量。所以说ACQUITY UPLC /Xevo G2-S QTof系统在定性和定量方面都表现出色，完全可以满足药物研发、
分析过程中需求。
