近红外激光器与SilVIR探测器助力高级多色荧光共聚焦成像
激光扫描共聚焦显微镜是流行的生物研究工具。它们通常用于同时对多个荧光团进行成像，具有良好的色彩分离效果，还能通过增强的层切功能对生物标本内部进行深层成像。
如今，炙手可热的激光技术创新可使此类应用受益，并实现高级别的实验。在这篇文章中，我们将讨论Evident的FV4000激光扫描共聚焦显微镜上的新型近红外(NIR)方案如何为高级多色荧光成像提供动力。
让我们先来了解一下多色成像实验的历史。多年来，许多研究人员都使用DAPI和其他两种颜色（通常是绿色和红色光谱）进行免疫荧光检测。
随着抗体和成像系统的发展，有了更多的探测器和更出色的发射波长滤色镜，四色免疫荧光开始流行。最常见的四色组合是将DAPI、绿色、红色和近红外色组合在一张图像中。
但有两个关键因素阻碍了第五或第六个通道的引入：
1.缺乏光束质量好的近红外激光二极管
首先，适合共聚焦显微镜的光束质量好的近红外激光二极管并不容易获得。足够的功率（但不能过高）、极低的功率波动和兼容的光束轮廓都是用于共聚焦成像的激光二极管的必要特征。但直到最近，在这些波长范围内也只有少数近红外激光二极管可供选择。
但由于全新激光二极管技术的出现，彻底改变了这一局面。我们的FV4000共聚焦显微镜现在提供685nm、730nm和785nm激光二极管，用于高效激发诸如下表所示的二级染料。
2.近红外波长灵敏度降低的光电倍增管
实现高效近红外成像的第二个挑战是，许多被用作激光扫描共聚焦显微镜标准探测器的光电倍增管(PMT)在近红外波长区域（750nm以上）的典型检测波长下灵敏度下降。
这种近红外探测范围内灵敏度降低的情况，对于在可见光谱中部具有较高灵敏度的GaAsP PMT来说尤其如此。在750nm以上范围内，GaAsP探测器的灵敏度非常低。
为了克服这一挑战，我们在FV4000激光共聚焦显微镜中采用了SilVIR探测技术。我们的SilVIR探测器利用硅光电倍增管(SiPM)，这是一种半导体传感器，可在400nm到900nm的宽波长范围内采集高信噪比的荧光图像。
得益于这项技术，我们的FV4000系统可提供多达6个通道的SilVIR探测器，用于多色荧光应用。
与我们的X Line高性能物镜配套使用，FLUOVEW FV4000系统可在400-1000nm范围内提供高质量的宽色差校正。SilVIR探测器和X-Line物镜的结合使多色荧光成像和整体近红外成像的可靠性大大提高。
同时，近红外成像的效率受到光路系统多方面的影响，物镜的红外透过率和检测器的检测效率毋庸置疑是核心因素，但对于激光扫描共聚焦系统，扫描单元的扫描振镜涉及多次光路的传输，红外的反射效率对图像亮度的影响是指数级的，Evident共聚焦系统采用具有银镀膜的扫描振镜，对比传统铝镀膜，反射效率更高，在红外波段的反射效率差异尤其明显，这大大降低了红外光信号的损失，保证了最终红外信号的高灵敏探测。
秉承百年科学探索精神，Evident不断为生命科学研究提供创新工具和解决方案，助力探索生命奥秘。想要进一步了解FV4000激光共聚焦显微镜如何助力您的科学研究，欢迎随时联系Evident申请演示，或识别以下二维码，了解详细的技术规格和案例应用。
更多精彩内容，敬请关注我们的视频号：
如今，炙手可热的激光技术创新可使此类应用受益，并实现高级别的实验。在这篇文章中，我们将讨论Evident的FV4000激光扫描共聚焦显微镜上的新型近红外(NIR)方案如何为高级多色荧光成像提供动力。
在共聚焦显微镜检查中同步采集5个以上通道
利用FV4000系统克服技术挑战
利用FV4000系统克服技术挑战
让我们先来了解一下多色成像实验的历史。多年来，许多研究人员都使用DAPI和其他两种颜色（通常是绿色和红色光谱）进行免疫荧光检测。
随着抗体和成像系统的发展，有了更多的探测器和更出色的发射波长滤色镜，四色免疫荧光开始流行。最常见的四色组合是将DAPI、绿色、红色和近红外色组合在一张图像中。
但有两个关键因素阻碍了第五或第六个通道的引入：
1.缺乏光束质量好的近红外激光二极管
首先，适合共聚焦显微镜的光束质量好的近红外激光二极管并不容易获得。足够的功率（但不能过高）、极低的功率波动和兼容的光束轮廓都是用于共聚焦成像的激光二极管的必要特征。但直到最近，在这些波长范围内也只有少数近红外激光二极管可供选择。
但由于全新激光二极管技术的出现，彻底改变了这一局面。我们的FV4000共聚焦显微镜现在提供685nm、730nm和785nm激光二极管，用于高效激发诸如下表所示的二级染料。
| 激光 | 荧光染料 | λ_Ex (nm) | λ_Em (nm) |
|---|---|---|---|
| LD685 | Alexa Fluor 680 | 679 | 702 |
| DyLight 680 | 692 | 712 | |
| Alexa Fluor 700 | 696 | 719 | |
| iRFP720 | 702 | 720 | |
| LD730 | ATTO 740 | 743 | 763 |
| DiR | 750 | 782 | |
| Alexa Fluor 750 | 752 | 779 | |
| Cy7 | 753 | 775 | |
| DyLight 755 | 754 | 776 | |
| LD785 | DyLight 800 | 777 | 794 |
| IR Dye 800CW | 778 | 794 | |
| Alexa Fluor 790 | 782 | 805 | |
| Cy7.5 | 790 | 810 |
以上染料以及越来越多的新型荧光团使得增加第五和第六个同步通道进行多色成像变得更具吸引力。
2.近红外波长灵敏度降低的光电倍增管
实现高效近红外成像的第二个挑战是，许多被用作激光扫描共聚焦显微镜标准探测器的光电倍增管(PMT)在近红外波长区域（750nm以上）的典型检测波长下灵敏度下降。
这种近红外探测范围内灵敏度降低的情况，对于在可见光谱中部具有较高灵敏度的GaAsP PMT来说尤其如此。在750nm以上范围内，GaAsP探测器的灵敏度非常低。
为了克服这一挑战，我们在FV4000激光共聚焦显微镜中采用了SilVIR探测技术。我们的SilVIR探测器利用硅光电倍增管(SiPM)，这是一种半导体传感器，可在400nm到900nm的宽波长范围内采集高信噪比的荧光图像。
利用近红外标记，实现5~6色荧光同步光谱成像
得益于这项技术，我们的FV4000系统可提供多达6个通道的SilVIR探测器，用于多色荧光应用。
与我们的X Line高性能物镜配套使用，FLUOVEW FV4000系统可在400-1000nm范围内提供高质量的宽色差校正。SilVIR探测器和X-Line物镜的结合使多色荧光成像和整体近红外成像的可靠性大大提高。
同时，近红外成像的效率受到光路系统多方面的影响，物镜的红外透过率和检测器的检测效率毋庸置疑是核心因素，但对于激光扫描共聚焦系统，扫描单元的扫描振镜涉及多次光路的传输，红外的反射效率对图像亮度的影响是指数级的，Evident共聚焦系统采用具有银镀膜的扫描振镜，对比传统铝镀膜，反射效率更高，在红外波段的反射效率差异尤其明显，这大大降低了红外光信号的损失，保证了最终红外信号的高灵敏探测。
秉承百年科学探索精神，Evident不断为生命科学研究提供创新工具和解决方案，助力探索生命奥秘。想要进一步了解FV4000激光共聚焦显微镜如何助力您的科学研究，欢迎随时联系Evident申请演示，或识别以下二维码，了解详细的技术规格和案例应用。
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