微生物限度检测过滤法的介绍、选型及步骤

微生物限度检测是一种在生物制药、医疗器械、化妆品企业、食品饮料、医疗疾控、第三方检测、检验检疫等单位机构中广泛进行的，主要是用来评估药品、食品饮料、生物制剂、化妆品、医疗器械等产品中微生物污染程度的质量控制方法。可以检测样品中需氧菌、霉菌、酵母菌总数，以及特定致病菌——如大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等特定病原微生物的存在，目的是确保产品中的微生物数量在安全范围内，避免对消费者和使用者健康造成危害。更具体的来讲，在制药行业，能确保无菌或微生物限度，符合中国药典、美国FDA等各国药品监督的要求；在食品饮料生产时，保障出厂的产品安全，防止微生物污染印发的健康风险；在化妆品企业，确保产品微生物指标符合卫生标准规范。
       
进行微生物限度检测的主要几种方法有以下几种：平皿计数法，直接通过培养基培养并计数微生物；最可能数法，是通过统计方法估算微生物数量；快速检测法，如PCR、ATP生物发光法等，用于快速筛查；膜过滤法，适用于液体样品，过滤后培养并计数。
       
在上述几种方法中，平皿法通常用于不可过滤的固体或高黏度样品，或者少量的滤液（10ml以下）；最可能数法由于通过统计的方法估算的数值，结果准确度低。 目前使用最广泛的是膜过滤法，其在微生物检测中具有显著优势。其原理是将一定量的待检测液体样品，倒入过滤杯中，使用真空泵产生的负压吸引力，使液体能通过滤膜，微生物被截留在膜上，然后将滤膜置于培养基上培养，最后计数形成的菌落。所以滤膜法能够富集样品中的微生物，即使微生物浓度很低（如1 CFU/100mL），也能通过增加过滤液体的总容量来提高检测灵敏度。 在具体准备过滤装置时，应当注意过滤装置的联数，联数是指单次可以同时过滤的样品数量。例如R300B单联微生物检测抽滤装置，采用的是常规的上方过滤漏斗，连接底部集液瓶的结构形式，滤液通过滤膜后直接流入底部试剂瓶待实验结束后处理，抽滤瓶带有接口连接真空泵来进行抽气形成负压吸引力。单联过滤装置结构简单，整体尺寸小巧，占用空间少，每次过滤一组样品，较为适合检测样品量不大的用户。 而针对大型企业，或者是疾控、第三方检测等单位，由于检测样品数量多，如果每次只能过滤一组样品，效率低下。这时候就可以使用多联过滤系统，它是通过一组使用金属材质制作的过滤支架，将多组过滤杯连接起来，使其可以通过同一台真空泵来抽气产生负压吸力。典型的如BV-321-A三联式和BV-621A六联式微生物限度检测真空抽滤系统，可以同时过滤3组或6组样品。支架采用耐腐蚀的阳极铝合金材质制作，对应插入3或6支过滤漏斗，漏斗中间放置滤膜。支架侧边带有接口连接一个大容量的集液瓶，滤液通过滤膜后流入集液瓶内暂存，集液瓶底部带快速排液口，瓶满后松开排液管夹可以快速导出滤液，不需要停下工作打开集液瓶盖的繁复操作。集液瓶的顶部有2个接口，一个连接支架、另一个接抽滤泵，这样即可以实现1台泵搭配1只集液瓶，同时处理数个过滤漏斗内的样品，大幅提升过滤效率。
       
在选择合适的机型后，具体进行检测大致包含以下步骤：
1. 准备滤膜：选择合适的滤膜并灭菌，也可以直接选购已经伽马射线（辐照）灭菌的无菌包装过滤膜。滤膜材质通常推荐使用MCE混合纤维素材料。直径根据过滤装置的漏斗大小来选择，一般为47或50mm较为常见。空间根据需要检测的微生物来觉得，一般为0.22或0.45微米。推荐使用带网格线的过滤膜，便于计数时的观察。
2. 过滤样品：将液体样品通过滤膜过滤，微生物被截留。具体根据选择的过滤装置型号参加说明书操作。
3. 转移滤膜：将滤膜移至适当的培养基上。
4. 培养：在适宜条件下培养，使微生物生长。
5. 计数：培养结束后，计数滤膜上的菌落数。