如何扫描出高质量的数字病理切片操作指导原则

目前许多基层医院都购置了数字病理扫描仪（WSI扫描仪），但不是把病理切片放到WSI扫描仪上就自动地得到诊断质量的数字切片图像，扫描前的固定、染色等制片许多步骤会极大地影响随后的扫描质量，甚至导致扫描失败，这与您使用什么品牌的扫描仪无关。你想从你的病理切片扫描出高质量的图像，以下注意事项可以帮助您使用好WSI扫描仪  

1. 组织准备 高质量制备的组织至关重要的，最好的数码扫描仪也无法弥补样本质量差等不足。组织准备的多个步骤可能会影响最终的图像扫描。

• 切片-WSI扫描仪的聚焦范围比传统显微镜小，标准组织厚度（3–5μm）将给出最佳结果。对于厚切片，可能需要进行多平面（z-stack）扫描。
• 染色-染色强度的控制至关重要，过深、过浅将使扫描仪更难自动识别组织，常常需要更多的人工操作。
• 贴片——与传统显微镜一样，数字WSI扫描仪在平的组织表面工作效果最好。尽最大努力避免组织折叠，才能对焦清晰。
• 盖玻片-扫描切片，最好使用玻璃盖玻片，塑料盖玻片可能会随着时间的推移而扭曲从而影响扫描仪的聚焦。与传统显微镜一样，确保盖玻片下没有气泡，以防止扫描失焦。

 
2. 切片检查和准备

• 为了提高扫描的成功率和图像质量，请务必在扫描前检查并清洁切片。
• 切片上的标签、胶带都有可能影响平整度妨碍扫描操作。用超细纤维擦镜布小心地擦拭切片，可以有效地清除上下表面的灰尘、水渍或指纹。对于不易清除的污渍，用水或酒精溶液将其浸湿后再擦拭清洁。
• 检查切片有无裂纹或缺口，尤其是切片的4个角处。任何松动的玻璃碎片都可能在扫描过程中脱落并损坏扫描机构。
• 等到切片完全干燥后再装入扫描仪，以免残留液体进入扫描仪内。
• 确保将切片平放在扫描仪机架或托盘中，并固定好。如果扫描过程中切片不平整，则很可能在扫描中出现大面积失焦区域。切片底部贴标签可能导致切片放置不平整，请确保这些标签仅粘贴到切片朝上那一面。。

 
3. 扫描切片
每家WSI扫描仪都有自己的工作流程和要求。然而，为了扫描出好的图像，还是有一些共同的原则要遵循：

• 扫描仪应能自动识别所有组织、鉴别所有的非组织物体如标签，手工标注痕迹。组织染色过深、过浅、过多灰尘、手工标注痕迹都会影响组织区域的准确检测。有可能的话，在高分辨率扫描之前，用制片质量不佳切片的测试组织检测，以避免以后需要重新扫描。
• 聚焦应该是自动的，并且预对焦的焦点应该均匀地分布在整个组织上。如果一个区域扫描时失焦，请尝试手动在这个区域设置对焦点。
• 避免将焦点设置到盖玻片上或下面有碎屑、气泡或其他缺陷的区域。这些可能会导致扫描仪聚焦在不正确的扫描平面上，导致扫描失焦。
• 对于高倍率的油镜扫描，确保在扫描前加了足够的油，以防止扫描过程中物镜变干，从而在扫描图像上留下“条纹”伪影。同时也要防止过多的油会渗到盖玻片下，在扫描时留下“光滑”的外观，导致细胞边缘的对比度变差。有经验的技术员正式油镜扫描前的先进行一个快速的测试扫描会很有帮助。扫描结束后，一定要清理掉残留油。

 
4. 质量控制（QC）
尽管做了很多努力，但也不能保证每次扫描结果都能接受。虽然每个实验室的质量控制过程都会有所不同，也应该始终遵循您所在机构的质量控制要求，不过，通过图像查看器用以下方法，可以让您快速和高效的进行QC。

• 先在低倍率（如4倍）下检查整个数字切片，检查是否有可见的失焦区域或错位。
• 在高倍率、高分辨率图像条件下，在组织切片的最宽处以单个水平路径进行查看，一个个视野基层，主要检查是否有细微的失焦或细微的错位。在垂直方向上，从组织的最宽处边缘到另一侧边缘，以一条完整的直线进行检查，每次一个视野，主要看是否有任何失焦的区域。在高倍镜下抽检切片的几个区域，特别是组织厚度不同或载玻片有缺陷的区域，这些区域是最有可能失焦的区域。

遵循这些简单的指导原则，就能帮助您生成更高质量的数字图像，永久保存，随时查看、共享和分析。