新版欧盟GMP附录要求下的环境监测仪器选择
2020年新版欧盟GMP附录1更新，对于环境中粒子和微生物监测的要求更加严格，在如此严格的要求下，我们该如何选择环境监测仪器呢？
一、洁净室分类的说明
对于粒子要求
4.29中提到：对于洁净室分类，应测量等于或大于0.5和5μm的空气中颗粒物。对于静止的A级区域和B级区域，分类应包括对等于或大于0.5μm的颗粒进行测量； 但是，要使用更大的第二个粒径（例如可以考虑符合ISO 14644的1μm）。该测量应在静止和运行状态下进行。对于各级别洁净室的要求如下
二、环境监测的说明
应进行风险评估，以建立全面的环境监测计划，即采样地点、监测频率、所用监测方法和培养条件（例如时间、温度）有氧和/或厌氧条件）。
在包括设备安装在内的所有关键阶段，应对操作中的洁净室、洁净空气设备和人员进行常规监测。
对A级区域的监控应证明关键操作期间无菌工艺条件的维护。
取样方法不应对生产操作造成污染风险。
应设定A级（仅指不能存活的颗粒）、B级、C级和D级的警报级别，以检测并解决不利趋势。
环境监测非活性粒子即悬浮粒子
A级区域依然保留对≥5μm粒子的监控，关键点应连续监测，并强调了超过警戒值报警的重要性。对于B级别区域也建议有同样的要求。
环境监测活性粒子即微生物
对于A级区也要进行连续的空气监测，并在整个关键工艺过程中使用，包括浮游菌和沉降菌的采样。对于B级区域，考虑其对A级区域的风险传递，也应该采用连续检测系统。
值得关注的是，在A级区域的监测标准中，各项均应无增长，若有任何增长，都要进行调查。
综合以上说明，可见新版文件对洁净室的粒子和微生物控制上更加严格和细化，尤其对于高级区和高风险区的要求，测试点位也要根据风险评估增加，不止是ISO14644上规定的点位。
一、粒子计数器
二、浮游菌采样器
正常使用情况下，可连续使用10小时
有连续和间歇采样模式，间歇模式可在整个生产过程中持续采样
新版欧盟GMP附录1内容解读
在洁净室粒子的控制上，分为洁净室分类要求和环境监测要求，使得标准更加细化。一、洁净室分类的说明
对于粒子要求
4.29中提到：对于洁净室分类，应测量等于或大于0.5和5μm的空气中颗粒物。对于静止的A级区域和B级区域，分类应包括对等于或大于0.5μm的颗粒进行测量； 但是，要使用更大的第二个粒径（例如可以考虑符合ISO 14644的1μm）。该测量应在静止和运行状态下进行。对于各级别洁净室的要求如下
| Grade | Maximum limits for particulates
≥0.5μm/m3
|
Maximum limits for particulates
≥5μm/m3
|
||
| At rest | In operation | At rest | In operation | |
| A | 3520 | 3520 | Not applicable | Not applicable |
| B | 3520 | 352000 | Not applicable | 2900 |
| C | 352000 | 3520000 | 2900 | 29000 |
| D | 3520000 | Not defined | 29000 | Not defined |
对于AB高级别区域的分级，不再使用5μm粒径作为判断标准，采用更严格的1μm作为第二粒径测量，并且静止状态和运行状态都是同样要求。这无疑是加大了对洁净室环境和设备粒子控制以及检测仪器的要求。
4.30中提到：对于洁净室的分类，可以在ISO 14644第1部分中找到最少的采样数量及其位置。此外，对于无菌加工区和背景环境（分别为A级区域和B级区域），采样位置还应考虑所有关键的加工区域，例如灌装点和加塞点。关键加工位置应基于文件化的风险评估以及对该区域要执行的工艺和操作的了解。
在AB级区域，除了要求的采样点之外，还要对关键区域进行风险评估，并选定合适的采样点以增加至日常采样点。
对于微生物要求：
4.33提到：洁净室的微生物浓度应作为洁净室资格的一部分进行测定。取样位置的数量应基于文件化的风险评估，包括分类的结果。空气可视化研究和在该区域执行的工艺和操作的知识。表2给出了每个等级的合格期间微生物污染的最大限值。鉴定应包括静止状态和运行状态。
结合GMP中注意事项及实际操作情况，在微生物的取样过程中，静态和动态情况下都要监测，对于A级区域，测试结果应是无任何增长的，比原来的平均值<1更加严格，并且明确提出，取样方法不应对生产操作造成污染。这要求了人员和仪器以及操作上均不应对A级区域造成任何的污染。4.30中提到：对于洁净室的分类，可以在ISO 14644第1部分中找到最少的采样数量及其位置。此外，对于无菌加工区和背景环境（分别为A级区域和B级区域），采样位置还应考虑所有关键的加工区域，例如灌装点和加塞点。关键加工位置应基于文件化的风险评估以及对该区域要执行的工艺和操作的了解。
在AB级区域，除了要求的采样点之外，还要对关键区域进行风险评估，并选定合适的采样点以增加至日常采样点。
对于微生物要求：
4.33提到：洁净室的微生物浓度应作为洁净室资格的一部分进行测定。取样位置的数量应基于文件化的风险评估，包括分类的结果。空气可视化研究和在该区域执行的工艺和操作的知识。表2给出了每个等级的合格期间微生物污染的最大限值。鉴定应包括静止状态和运行状态。
| Grade | Air sample CFU/m3 |
Settle plates (diameter 90mm) cfu/4 hours |
Contact plates (diameter 55mm) cfu/plate |
| A | No growth | ||
| B | 10 | 5 | 5 |
| C | 100 | 50 | 25 |
| D | 200 | 100 | 50 |
二、环境监测的说明
应进行风险评估，以建立全面的环境监测计划，即采样地点、监测频率、所用监测方法和培养条件（例如时间、温度）有氧和/或厌氧条件）。
在包括设备安装在内的所有关键阶段，应对操作中的洁净室、洁净空气设备和人员进行常规监测。
对A级区域的监控应证明关键操作期间无菌工艺条件的维护。
取样方法不应对生产操作造成污染风险。
应设定A级（仅指不能存活的颗粒）、B级、C级和D级的警报级别，以检测并解决不利趋势。
环境监测非活性粒子即悬浮粒子
A级区域依然保留对≥5μm粒子的监控，关键点应连续监测，并强调了超过警戒值报警的重要性。对于B级别区域也建议有同样的要求。
| Grade | Maximum limits for particulates ≥0.5μm/m3 |
Maximum limits for particulates ≥5μm/m3 |
||
| At rest | In operation | At rest | In operation | |
| A | 3520 | 3520 | 29 | 29 |
| B | 3520 | 352000 | 29 | 2900 |
| C | 352000 | 3520000 | 2900 | 29000 |
| D | 3520000 | Not defined | 29000 | Not defined |
对于A级区也要进行连续的空气监测，并在整个关键工艺过程中使用，包括浮游菌和沉降菌的采样。对于B级区域，考虑其对A级区域的风险传递，也应该采用连续检测系统。
值得关注的是，在A级区域的监测标准中，各项均应无增长，若有任何增长，都要进行调查。
| Grade | Air sample CFU/m3 |
Settle plates (diameter 90mm) cfu/4 hours |
Contact plates (diameter 55mm) cfu/plate |
Glove print,Including 5 fingers on both hands cfu/glove |
| A | No growth | |||
| B | 10 | 5 | 5 | 5 |
| C | 100 | 50 | 25 | |
| D | 200 | 100 | 50 | |
综合法规要求，环境监测仪器应具备哪些特点呢？结合Lighthouse仪器举例说明粒子计数器
一、粒子计数器
- 内置HEPA过滤器，采样过程中不可产生粒子污染洁净区
- 根据不同要求，可任意设置多种采样程序
- 操作简便，在洁净区内应进行较少的操作，避免人员对洁净区产生过多的污染
- 可测定多种粒径（至少有0.5μm、1μm和5μm）
- 可设置警报，根据不同情况设置不同的警戒值和报警值
- 仪器应可持续监测，电池耐用
- 易清洁消毒，耐受消毒剂
- 具有审计追踪功能，符合21CFR要求
二、浮游菌采样器
- 内置HEPA过滤器，采样过程中不可产生粒子污染洁净区
- 若无在线监测系统，仪器应可持续监测，电池耐用
正常使用情况下，可连续使用10小时
有连续和间歇采样模式，间歇模式可在整个生产过程中持续采样
- 易清洁消毒，耐受消毒剂
- 必要时可进行远程采样
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