实验动物麻醉操作讲解
麻醉的分类：根据麻醉范围主要分为全身麻醉和局部麻醉，全身麻醉又分为吸入麻醉和非吸入麻醉。
1. 全身麻醉：
吸入麻醉：又称为气麻，将挥发性或气体麻醉剂，由动物呼吸道吸入体内而产生麻醉效果；大小鼠实验中常用乙醚异氟烷、七氟烷等麻醉剂；
非吸入麻醉：即注射麻醉，包括肌肉、腹腔、静脉注射，大小鼠实验中常用阿佛丁、戊巴比妥钠、水合氯醛和氯胺酮等麻醉剂。
2. 局部麻醉：
指通过麻醉药阻断机体某一部分的感觉神经传导功能，而运动神经传导保持完好或同时有程度不等的被阻滞状态。
下面就介绍几种常见的麻醉剂的使用方法：
一、吸入式麻醉
起效快，恢复也快，且麻醉的深度和维持时间易控制，被认为是啮齿类动物最可靠的麻醉方式。我们下面主要介绍2种常见的麻醉剂——异氟烷和乙醚。
1. 乙醚(Diethyl ether）
特点：为高度易挥发性液体，被吸收后会广泛抑制中枢神经系统，操作简单，见效快；
操作方式：将被乙醚浸湿的消毒脱脂棉球或纱布放入烧杯（常用1000ml）内，将实验动物放入，用塑料薄膜封口，观察，会发现动物先开始兴奋，继而出现抑制，自行倒下。若实验时间过长，可将动物固定在实验台上，将含有乙醚的棉球靠近其鼻部，保持吸入状态；
缺点：但其对呼吸系统有刺激性，可增加呼吸道分泌物；若麻醉过深，可导致动物死亡；由于其会对实验动物有害，且可能造成的操作人员危险等原因，目前使用相对较少[1]。
适用实验：由于起效和维持时间短，仅5-10min，主要用于短时间的浅麻实验，如大鼠眼眶取血等简单实验。
2. 异氟烷 (Isoflurane)
特点：异氟烷为无色的澄明液体，易挥发，具有轻微气味；诱导和复苏均较快，加上不会影响动物的生理指标，在动物实验中的应用日趋广泛；
操作方式：一般使用时会配专用的吸入麻醉机，混合纯氧进行麻醉，通过氧气气流使异氟烷挥发，诱导麻醉一般使用2~3%的浓度，维持使用1.5~2%。一般在麻醉机连接一个麻醉罐子，如果单独维持麻醉操作就使用面罩比较合适。一般小鼠的麻醉时间为2~3min，大鼠的麻醉时间为4~5min；
莱艾特科技异氟烷使用装置
适用实验：研究表明，异氟烷麻醉能维持动物的心率、血氧分压、血液pH等生理功能处于稳定状态[2]，适合情况复杂且持续时间较长的动物实验[3]，包括连续监测动物参数变化如成像技术、还有一些其他全麻药不宜使用的疾病，例如癫痫、颅内压增高、重症肌无力、糖尿病等。
二、注射式麻醉
一种既简单方便，又能使动物很快进入麻醉期，而无明显兴奋期的方法。水合氯醛、戊巴比妥钠、阿佛丁和氯胺酮是目前大小鼠实验中最常用的注射类麻醉剂。
1. 水合氯醛（Chloral hydrate）
特点：有效的镇静催眠药，但本品麻醉剂量与中毒量很接近，所以安全范围小，使用时要注意；另外对皮肤和黏膜有较强的刺激作用；
推荐用药浓度及配比：一般配置浓度为4%~10%（质量体积比，4-10g溶于100ml灭菌水），大小鼠用药量为：300~500mg/kg。
2. 戊巴比妥钠（Pentobarbital）
特点：临床上常用，随用量而产生镇静、催眠和抗惊厥效应，大剂量时则产生麻醉作用，常作为有效的镇静和麻醉剂。但它没有镇痛作用只有镇静作用，因此手术前配合镇痛剂使用效果会更好；
推荐用药浓度及配比：一般配置浓度为1%~3%，大小鼠用药量为：40~70mg/kg。
3. 阿佛丁（Avertin）
特点：阿佛丁学名三溴乙醇，曾被推荐作为转基因鼠传代有关的外科手术(如胚胎移植和输精管切除术)的麻醉剂；但配制较繁琐，保质期较短，保存时要防菌； 推荐用药浓度及配比：一般配置浓度为1.2%-2.5%（100%浓储液是10g阿佛丁与10mL 叔戊醇混合，使用时加灭菌蒸馏水稀释至1.2%-2.5%，4℃冷藏可保存2周；大小鼠用药量为：125~400mg/kg。
4. 氯胺酮（Ketamine）
特点：一种镇痛麻醉剂，注射后很快产生麻醉作用，使动物进入浅睡眠状态，麻醉的安全性相对较高；适用于各种表浅、短小手术麻醉及全身复合麻醉；
推荐用药浓度：大小鼠用药量为：100~150mg/kg。
5. 舒泰50
一种进口混合麻醉剂，麻醉效果非常，价格较贵
如下为上述几种麻醉剂的比较：
注：上述药品在大小鼠中一般采用腹腔注射方式，快速吸收，见效快！注射部位宜选在腹部后1/3处略靠外侧（避开肝和膀胱）
三、局部麻醉
局麻是指在手术的局部麻醉或者缓解局部疼痛和瘙痒时使用，优点是动物在麻醉期间能保持清醒，对重要脏器功能干扰轻微，麻醉并发症少，是一种较安全的麻醉方法。目前常用的局部麻醉剂有普鲁卡因、利多卡因和丁卡因。如下为这三类的比较[4]：
注：局麻一般采用浸润麻醉方法，操作时，动物固定好后，首先在局部皮肤用皮头针先作皮内注射，形成橘皮样丘疹，然后换成局部麻醉长针头，由皮点进针，放射到皮点周围继续注射，直到要求麻醉区域的皮肤都浸润为止；可以根据实验操作要求的深度按照皮下、筋膜、肌肉、腹膜或骨膜的顺序，依次注射麻药，以达到麻醉神经末梢的目的。
麻醉过程中常遇到的问题：
1. 麻醉时需要注意什么？
1)注意保温：动物在麻醉期间体温易下降，可将动物置于循环水恒温垫上进行保温；
2)注意观察：使用麻醉剂过程中随时检查动物的反应情况，如随时观察动物的肌张力、角膜反射、呼吸频率、夹痛反射等指标，避免动物出现死亡；
3)注意给药剂量：配制的药液浓度要适中不可过高，以免麻醉过急造成动物死亡；但也不能过低，以减少注入溶液的体积。除参照一般标准外，还应考虑个体对药物的耐受性不同，而且体重与所需剂量的关系也并不是绝对成正比的。一般说，衰弱和过胖的动物，其单位体重所需剂量较小。
2. 如何确认动物已完全麻醉？
以小鼠为例，麻醉起效：小鼠仰卧时心跳及呼吸均匀、肌肉松弛、四肢无活动，胡须无触碰反应，踏板反射消失，即视为达到完全麻醉状态。若小鼠的前肢开始抖动即判定为开始复苏。手术过程中如果发现动物抽搐、排尿，说明麻醉过深，应立即进行急救。
3. 若小鼠出现复苏迹象怎么办？
若实验还没有完成，小鼠接近苏醒，需及时将麻醉瓶（气麻）放在动物口、鼻处，给予辅助吸入麻醉或可临时适当补加麻醉剂，一般每次补加剂量不超过注射总量的1/10∼1/5。
４. 给药方式一般除了腹腔注射还有哪些？
非吸入麻醉常采用的注射方法有：静脉注射，肌肉注射，腹腔注射等。静脉与肌肉注射多用于较大的动物，如犬、猫、猪、犬等；静脉注射的部位多是耳缘静脉（家兔、猫、猪）、后肢静脉（犬）及尾静脉（大、小鼠）；肌肉注射的部位多选用臀部。腹腔注射多用于较小的实验动物，如大鼠、小鼠、沙鼠、豚鼠等。
5. 吸入式麻醉和注射式麻醉如何选择？
1）吸入麻醉的优缺点:较好的控制麻醉深度，快速进入麻醉状态，苏醒迅速、平稳，对肝、肾功能影响轻微；但挥发性麻醉药被人体长期吸入后会对医护人员造成身体上的伤害，且每种挥发性麻醉药的挥发罐的价格昂贵。
2)非吸入麻醉的优缺点：操作简便，无需特殊的麻醉装置，与吸入麻醉相比成本较低。但不能灵活掌握用药的剂量、麻醉深度以及麻醉维持时间，且麻醉药物需要通过肝脏代谢，肾脏排出，因此相比之下对肝脏和肾脏的影响较大。
总之，吸入麻醉麻醉药安全性高，副作用低，安全可控；相比之下非吸入麻醉药对呼吸、心率及血氧饱和度等指标影响较大，因此安全性相对较低。在临床上如果条件允许，吸入麻醉是最理想的选择。
参考文献
[1] Ruizmeana M, Martinson E A, Garciadorado D, et al. Animal ethics in Cardiovascular Research[J]. Cardiovascular Research, 2012, 93(1): 1-3. [2] Low L A, Bauer L C, Klaunberg B A, et al. Comparing the Effects of Isoflurane and Alpha Chloralose upon Mouse Physiology.[J]. PLOS ONE, 2016, 11(5).
[3]王洋，陈克研，张贺，等．丙泊酚静脉麻醉与异氟醚吸入麻醉在巴马小型猪实验中的比较［J］．中国比较医学杂志，2012，22( 7).
[4]汤宏斌.《实验动物学》（第三版）[M]. 湖北人民出版社，2016.
[5]李 丹，郭玉莹，邓 昊，高 珊，徐士欣. 实验动物麻醉剂使用的福利伦理问题研究进展［J］. 中国比较医学杂志2017, 27( 9).
