q225荧光定量PCR仪高级热循环设置功能详解-Advanced Cycling
酷搏科技Quantagene q225荧光定量PCR仪配备了许多实用的功能。今天要给大家详细讲一讲高级热循环设置(Advanced Cycling)功能的使用方法。
q225默认的热循环程序模板，支持最多6个步骤和100个循环，足够满足绝大部分用户的使用需求。但是一些应用中，可能需要前几个循环设置不同的反应条件，例如样本为gDNA时升高前几个循环的解链温度，或为提高扩增特异性而升高前几个循环的退火温度等。这时候可以使用q225软件中的高级热循环设置功能。
后文的设置说明将以如下热循环程序为例：第1-5个循环：98 ℃ 10s，65 ℃ 30s；
第6-40个循环：95 ℃ 5s，60 ℃ 15s。
第一步 启动高级热循环设置功能
在q225操作软件菜单中选择
温度配置—》高级热循环设置
q225默认的热循环程序模板，支持最多6个步骤和100个循环，足够满足绝大部分用户的使用需求。但是一些应用中，可能需要前几个循环设置不同的反应条件，例如样本为gDNA时升高前几个循环的解链温度，或为提高扩增特异性而升高前几个循环的退火温度等。这时候可以使用q225软件中的高级热循环设置功能。
后文的设置说明将以如下热循环程序为例：第1-5个循环：98 ℃ 10s，65 ℃ 30s；
第6-40个循环：95 ℃ 5s，60 ℃ 15s。
第一步 启动高级热循环设置功能
在q225操作软件菜单中选择
温度配置—》高级热循环设置
打开后弹出高级热循环设置对话框
勾选启用高级热循环设置
勾选启用高级热循环设置
第二步 设置第1组循环
在左侧的编辑区域输入第1组循环，例如：
循环步骤数为2；
第一步解链：98 ℃ 10s；
第二步退火+延伸：65 ℃ 30s；
循环数为5；
在第2步采集荧光信号。
完成后点击应用
第3步 加入第2组循环
单击 插入 按钮，增加一组新的循环
在左侧的编辑区域输入第2组循环：
循环步骤数为2；
第一步解链：95 ℃ 5s；
第二步退火+延伸：60 ℃ 15s；
循环数为35；
在第2步采集荧光信号。
完成后点击应用
第4步 查看和编辑
在右侧的表格中可以看到每一组热循环的详细配置
通过单击左侧的 插入 删除 按钮，来新增和删除组
通过单击右侧表格，或者单击左侧组名两边的箭头，来切换当前编辑的温度组。
编辑完成后不要忘记点击 应用 按钮 使得更改生效哈
完成全部设置后，点击 确认 按钮
第5步 开始实验
返回主界面，可以看到原本设置循环温度和时间的区域，已经提示启用了高级热循环设置。
接下来就可以正常开始实验啦~
高级热循环功能
- 最多支持10组循环
- 每组循环支持最多6个步骤，循环数最多100
- 即总共支持最多1000个循环
另一种选择
如果在40个循环前，想要额外增加3个循环进行预扩增，预扩增阶段的温度设置与循环阶段的温度设置不同，且预扩增阶段不采集荧光（不参与Ct值计算）。
此时可以考虑在循环前步骤中开启循环功能
勾选 循环前 框中的 开启循环 选项
例如需要设置的温度参数为
热激活：95 ℃ 60s；
预扩增循环：3个循环，不采集荧光信号，98 ℃ 20s，65 ℃ 30s；
扩增循环：40个循环，95 ℃ 5s，60 ℃ 15s， 采集荧光。
扩增循环：40个循环，95 ℃ 5s，60 ℃ 15s， 采集荧光。
则按照上图进行设置，在开启循环下方，设置循环步骤为2-3，共3循环。
上述两个功能默认不开启，如有需要请联系技术支持为您开启。
本期高级热循环设置功能就为您介绍到这里。
如果您还需要何种功能的介绍，或者使用中有任何意见和建议，欢迎留言或者联系酷搏科技技术支持support@kubotechnology.com。
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