近红外染料的选用指南
Near-IR CF™ Dyes
荧光强度最高、最稳定的长波长染料。特别适合于活体动物体内成像
Near-IR CF dye flyer CF dye selection guide什么是近红外染料？
Biotium-Dyes-20111026.mov
图 1. Cy7，AlexaFluor750 和 CF750染料稳定性测试比较。图示为染料在阳光照射30分钟前（黑线）和照射后（灰线）的吸收光谱图。
近红外 CF 染料是由 Biotium 公司科研人员开发的一组吸收和发射波长在 650 到 800nm 之间的荧光染 料。近红外 CF 染料是为蛋白标记开发的，荧光强度远比其他相似波长的商业化染料更高， 同时也更稳定。
近红外染料和传统的可见光染料相比有显著的优势。由于细胞和组织的自发荧光在近红外波段最小，因此在检测复杂生物系统时，近红外染料能提供更高的特异性和灵敏度。同时，由于光波在近红外区段的组织透过性更好，因此近红外染料尤其适合体内荧光成像（活体成像）这一近几年迅速发展的新兴领域。另外，近红外染料也是细胞内/全细胞免疫印记和传统基于膜介质免疫印记的理想染料。
图 2. 用同型对照或鼠抗人CD3抗体作为一抗，用APC-AlexaFluor750 (Invitrogen) 或CF750标记的山羊抗鼠二抗染色Jurkat细胞。抗体用量如图上所列。用BD LSR II 流式细胞仪的633 nm激光器和780/60 nm PMT检测器分析荧光。柱状图代表了相对荧光值的几何均数。
近红外 CF 染料作为新一代的长波长染料，代表了这一领域的重大突破。现有商业化的近红外染料，由于染料的过分聚集以及稳定性差，因而受制于荧光亮度有限的问题。得益于 Biotium 公司科研人员采用的创新型分子工程学技术，近红外 CF 染料克服了上述问题，从而比其他竞争产品具备了关键性的优势：近红外 CF染料荧光强度极高并且非常稳定。例如CF750 亮度高至可以在 633nm 处激发（即在吸收峰值的肩部激发），而此时在 770 nm 左右的荧光发射强度仍然高于基于APC的串联染料。因此，近红外 CF 染料特别适合于流式细胞仪的各种应用，从而可以避免串联染料稳定性等带来的问题。
另外，近红外 CF 染料拥有专利的结构特性，这使近红外 CF染料和其他竞争产品相比免疫源性更小。因此，在标记同一个蛋白时，可以连接更多的近红外 CF 染料以获得最大的荧光亮度。同时，这样标记获得的蛋白复合物在体内的半衰期也更长。
最后一点，由于近红外 CF 染料优异的溶解性和大于 95% 的活化程度，它的标记效率也远远高于其他近红外染料。
产品特点：
产品应用：
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图 3. 柱状图代表了图2中相对荧光值几何均数的信噪比。
图 4.分别用CF750，AlexaFluor750或Cy7标记山羊抗鼠IgG二抗。用Hitachi F-4500荧光光度计测定荧光强度。上图所示为均一化的荧光值。
图 6. 用胞内CD3抗体或者同型对照孵育Jurkat 细胞并分别用1ug标记了Cy5.5，AlexaFluor680，CF680 或 DyLight680的山羊抗鼠 IgG 荧光二抗染色。用BD FACS Calibur流式细胞仪的FL4通道检测荧光。柱状图代表了CD3阳性荧光值和标记程度（DOL）相似的同型对照相比的信噪比。
图 5.分别用CF750，AlexaFluor750或Cy7标记山羊抗鼠IgG二抗。染料复合物的吸收光谱分别对各自的最大吸收值做均一化。Cy7和AlexaFluor750染料有较大的肩峰，显示了染料的高度聚集，而这种聚集对整体荧光强度是没有贡献的。
图 8. 用胞内CD3抗体或者同型对照孵育Jurkat 细胞并分别用1ug标记了CF770，DyLight 800 或 IRDye800CW的山羊抗鼠 IgG 荧光二抗染色。用BD LSR II 流式细胞仪的633 nm激光器和780/60 nm PMT检测器分析荧光。柱状图代表了相对荧光值的几何均数。
图 7.用鼠抗alpha-tubulin作为一抗，标记了CF680的山羊抗鼠IgG作为二抗染色HeLa细胞。使用以汞电弧灯作为光源的Olympus显微镜拍照，使用Cy5 滤镜组，CCD相机和 ImagePro Express软件获取照片。
图 9. 细胞数量2倍稀释的HeLa细胞培养在一块黑色侧壁，底部透明的96孔板中。将细胞固定、透膜并用鼠抗alpha-tubulin和兔抗COX IV分别作为一抗，选用CF770或IRDye 800(绿色)标记的山羊抗鼠IgG作为二抗，或者选用CF680或IRDye680(红色)标记的山羊抗兔IgG作为二抗染色，抗体的终浓度相同。染色后，细胞被干燥并用Odyssey®红外成像系统（Li-Cor）扫描。上面的两行细胞是用CF染料抗体复合物染色的，对应的下面两行细胞是用商品化购买的IRDye二抗（Li-Cor）染色的。
图 10. 两倍稀释的HeLa 细胞裂解液先在聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳，然后转印至硝酸纤维素膜上，并用鼠抗alpha-tubulin和兔抗COX IV分别作为一抗，选用CF770或IRDye 800(绿色)标记的山羊抗鼠IgG作为二抗，或者选用CF680或IRDye680(红色)标记的山羊抗兔IgG作为二抗染色，抗体的终浓度相同。染色后，膜被干燥并用Odyssey®红外成像系统（Li-Cor Biosciences）扫描。对条带定量后发现，CF染料的荧光强度大约是相对应IRDye 二抗（Li-Cor）的3.5倍。
图 11. 在尾静脉注射CF750标记的Avastin 24小时和96小时后，使用活体成像系统（Caliper LS）分别成像小鼠体内的肿瘤。图片来自于Caliper Life Sciences公司。
| CF Dye | Ex/Em** | 可完全替代以下产品： |
| CF680* | 681/698 | AF680,Cy5.5, DyLight680,IRDye680 |
| CF750 | 755/777 | AF750, Cy7 |
| CF770* |
770/797 | DyLight800, IRDye800 |
* 兼容 LI-COR Odyssey 系统
** Ex/Em 波长基于抗体复合物
** Ex/Em 波长基于抗体复合物
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