MEDUSA 96道移液器在磁珠法质粒DNA提取中的应用

1.  在96孔盘中按标准流程培养1.2ml细菌菌液到合适的浓度。（本实验中，为验证本方法对每个样品的平行性，采用培养250ml菌液，然后用96 道移液枪转移1ml到每个孔中）

2.  2,000 x g离心 5 分钟收集细菌，倒弃培养液。

3.  用96 道移液枪转移170ul Buffer P1/Rnase A至细菌沉淀团中。放置在振荡仪上，1500-2000rpm振荡 1-2 分钟充分重悬细菌。

4.  用 96 道移液枪转移 170ul Buffer P2 至细菌重悬液中。放置在振荡仪上，300-600rpm振荡混匀3 分钟裂解细菌。

5.  用 96 道移液枪转移 170ul Buffer N3 至细菌裂解液中。放置在振荡仪上，300-600rpm振荡混匀5 分钟中和。

6.  放到离心机中。4000-4700g离心 15 分钟沉淀去除杂质。

7.  小心取出96 孔板， 放置在 96 道移液移液枪的平台中。 调整好移移枪插入的深度， 吸取450ul上清液至新的96 孔反应板中。(若沉淀较多，可只转移 400ul)

8.  用 96 道移液枪加入 0.5 倍体积的磁珠结合液(Bind Beads)至样品中。放置在振荡仪上，1000-1200rpm振荡混匀1 分钟。室温静置 10 分钟 (处理低拷贝数的质粒2-8 ℃放置过夜) 。

9.  放置在磁力架上吸附磁珠5 分钟。用 96 道移液枪吸弃废液（吸取800ul以上）。

10. 用 96 道移液枪每孔加入600ul 70%乙醇至每一个孔中。放置在振荡仪上 1000-1200rpm振荡混匀1 分钟。

11. 放置在磁力架上吸附磁珠3 分钟。用 96 道移液枪吸弃废液（吸取650ul以上）。

12. 用 96 道移液枪每孔加入200ul 70%乙醇。放置在振荡仪上 1000-1200rpm振荡混匀1 分钟。

13. 放置在磁力架上吸附磁珠 3 分钟。用 96 道移液枪吸弃废液（吸取250ul以上）。

14. 室温干燥20 分钟。

15. 用 96 道移液枪每孔加入50-100ul灭菌水（Elution Buffer），放置在振荡仪上 1200-2000rpm振荡混匀2 分钟。