M2点样仪助力沙门氏菌血清分型检测
浏览次数:138 发布日期:2025-2-20
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沙门氏菌是一种能引起食源性疾病的细菌,广泛存在于各种食物、水、土壤以及动物粪便中。世界范围内每年患病人数约9500万例,症状表现为腹泻、发烧、腹部痉挛和呕吐等,严重可导致脱水性败血症甚至死亡。其血清亚型超过2500种,分型通常与宿主或地理位置有关,传统的凝集法不仅需要有丰富的技术经验,消耗大量的试剂和样品,检测周期也较长。相比之下,蛋白微阵列法(蛋白芯片检测技术)快速、特异性强、操作简单,同时不受限于数据库。另外,利用不同的特异性抗体检测多种抗原血清,可在一次实验中分析多种病原体。
2024年4月,来自德国莱布尼茨光子技术研究所和耶拿大学感染诊断学研究中心的Ralf Ehricht教授团队,在Pathogens杂志上发表了一篇题目为“A Proof-of-Concept Protein Microarray-Based Approach for Serotyping of Salmonella enterica Strains”的文章。基于蛋白微阵列(蛋白芯片检测技术)对肠道沙门氏菌进行血清分型。
该团队收集10种沙门氏菌免疫血清,并用缓冲液分别稀释6、8、10和20倍,大肠杆菌和 PBS 缓冲液为阴性对照,
德国M2-Automation生物芯片点样仪以17 × 17微阵列点样到96孔板(孔内底部功能化处理),每种样品重复点印至少四次(单孔内4个重复),点间距0.22 mm,静置偶联10分钟后,制备成微孔板蛋白芯片(如图1)。
图1:肠道沙门氏菌亚群蛋白微阵列芯片
(左图:10种沙门氏菌免疫血清1:6/1:8/1:10/1:20稀释后的点样阵列排布,4个重复阵列;右图:单孔内阵列示意图)
随后将32种不同的肠道链球菌亚型和1种邦戈沙门氏菌的菌株细胞,大肠杆菌细胞、PBS缓冲液分别加到微孔板蛋白芯片上,用HRP标记的抗沙门氏菌多克隆抗体杂交,继而加入TMB(四甲基联苯胺)底物显色进行斑点检测和数据分析(如图2)。
图2:基因分型检测示意图:沙门氏菌O或H抗原与特异性免疫血清结合,被酶标捕获抗体捕获,最后使用TMB(四甲基联苯胺)底物催化显色,进行信号检测。
结果:基于微阵列的斑点检测和数据分析,结合所有点样血清类型,显示出血清分型的高度准确性和特异性(如图3)
图3: 基因分型的结果分析(准确度、灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值)
微阵列检测具有足够的灵敏性和特异性,可有效用于血清分型或菌株筛选,是一种极具前景的快速检测手段和方法。
原文链接:https://doi.org/10.3390/ pathogens13050355
M2-Automation成立于2003年,总部位于德国柏林,是一家创新技术开发公司,专注于微量/超微量、非接触式自动化移液和生物芯片点样技术。仪器准确性、精确性高,重复性好,全程自动化点样,同时可根据客户需求进行定制。
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