实验数据说话:不同型号超声波DNA打断仪的实际效果对比
浏览次数:163 发布日期:2025-2-17
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实验目的:将全基因组DNA样品进行200-500bp区间的均一性片段化处理。
实验仪器及材料:
1.实验仪器:本次实验选用三款非接触打断仪器如下:小美超声-高通量声波基因组剪切仪、bioruptor-非接触式超声破碎仪、小美超声-聚能式超声波DNA打断仪。
2.实验材料:核酸浓度为160 ng/μL的全基因组DNA溶液。
实验步骤:
1.提前15分钟将三款仪器的冷水机启动,设置温度为4℃。
2.将每个爱思进品牌的1.5 mL EP管加入100 μL 浓度为160 ng/μL的全基因组DNA溶液。
3.将2管装好样品的1.5 mL EP 管分别放入三款仪器的适配器当中,其他空余的孔位由加同样体积水的1.5 mL EP 管补齐。
4.程序设置:温度4℃,超声工作时间20s 间隔时间10s,总时长15分钟和20分钟,二个梯度对比。
5.程序结束后,取出样品使用毛细管电泳进行基因组片段化检测。
实验结果:
1.小美超声-高通量声波基因组剪切仪
①程序设置:温度4℃,超声工作时间20s 间隔时间10s,总时长15分钟
平均片段大小:310.0 bp
片段范围 bp |
占比 % |
25-100 |
4 |
100-200 |
21.3 |
200-500 |
64.7 |
500-904 |
10 |
②程序设置:温度4℃,超声工作时间20s 间隔10s,总时长20分钟
平均片段大小:300.1 bp
片段范围 bp |
占比 % |
25-100 |
4.2 |
100-200 |
22.7 |
200-500 |
64.3 |
500-904 |
8.8 |
2.bioruptor-非接触式超声破碎仪
①程序设置:温度4℃,超声工作时间20s 间隔时间10s,总时长15分钟
平均片段大小:432.9 bp
片段范围 bp |
占比 % |
24-100 |
1.4 |
100-200 |
7.8 |
200-500 |
58.3 |
500-891 |
32.5 |
②程序设置:温度4℃,超声工作时间20s 间隔时间10s,总时长20分钟
平均片段大小:405.8 bp
片段范围 bp |
占比 % |
24-100 |
1.5 |
100-200 |
9.5 |
200-500 |
63.2 |
500-904 |
25.8 |
3.小美超声-聚能式超声波DNA打断仪
①程序设置:温度4℃,超声工作时间20s 间隔时间10s,总时长15分钟
平均片段大小:365.5 bp
片段范围 bp |
占比 % |
24-100 |
2.1 |
100-200 |
13.6 |
200-500 |
65.4 |
500-904 |
18.9 |
②程序设置:温度4℃,超声工作时间20s 间隔时间10s,总时长20分钟
平均片段大小:388.1 bp
片段范围 bp |
占比 % |
24-100 |
1.9 |
100-200 |
12.3 |
200-500 |
62.2 |
500-904 |
23.6 |
4.三款仪器实验结果汇总
|
总时长15分钟
200-500 bp区间占比 |
总时长20分钟
200-500 bp区间占比 |
峰图趋势 |
小美超声-高通量声波基因组剪切仪 |
64.7% |
64.3% |
平缓 |
bioruptor-非接触式超声破碎仪 |
58.3% |
63.2% |
陡坡 |
小美超声-聚能式超声波DNA打断仪 |
65.4% |
62.2% |
陡坡 |
注:当基因组片段在200-500 bp区间占比越高,峰图越平缓状时,说明基因组片段的均一性更好,反之亦然。
在样品、程序设定等条件相同的情况下,bioruptor的非接触式超声破碎仪和小美超声的聚能式超声波DNA打断仪在200-500 bp区间占比分别达到58.3%和65.4%,且二者峰图呈陡坡状,表明基因组片段化均一性差。
小美超声的高通量声波基因组剪切仪在200-500 bp区间占比达到64.7%,峰图呈平缓状,表明基因组片段均一性更好。